[发明专利]具有抑制纤溶酶活性的重组textilinin-1及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有抑制纤溶酶活性的重组textilinin-1，其氨基酸序列为： 

KDRPDFCELP  ADTGPCRVRF  PSFYYNPDEK  KCLEFIYGGC  EGNANNFITK  EECESTCAA，其特征在于，所述具有抑制纤溶酶活性的重组textilinin-1，是通过将人工合成的textilinin-1结构基因在酵母菌中，或者在CHO细胞或其它哺乳动物细胞中，以分泌表达的方式大量产生获得，其中人工合成textilinin-1结构基因序列为： 

1    AAG GAT AGA CCA GAT TTT TGT GAA TTG CCA GCT GAT ACT GGT CCA   45

46   TGT AGA GTT AGA TTT CCA TCT TTT TAC TAC AAC CCA GAT GAA AAG   90

91   AAG TGT TTG GAA TTT ATT TAC GGT GGT TGT GAA GGT AAC GCT AAC  135

136  AAC TTT ATT ACT AAG GAA GAA TGT GAA TCT ACT TGT GCT GCT TAA  180。

2.一种权利要求1所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于，制备方法为：将人工合成的textilinin-1结构基因在酵母菌中，或者在CHO细胞或其它哺乳动物细胞中，以分泌表达的方式大量产生重组textilinin-1，其中人工合成textilinin-1结构基因序列为： 

1    AAG GAT AGA CCA GAT TTT TGT GAA TTG CCA GCT GAT ACT GGT CCA   45

46   TGT AGA GTT AGA TTT CCA TCT TTT TAC TAC AAC CCA GAT GAA AAG   90

91   AAG TGT TTG GAA TTT ATT TAC GGT GGT TGT GAA GGT AAC GCT AAC  135

136  AAC TTT ATT ACT AAG GAA GAA TGT GAA TCT ACT TGT GCT GCT TAA  180。

3.按照权利要求2所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：所述酵母菌为甲醇酵母菌。

4.按照权利要求3所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中实现分泌表达时，依据textilinin-1的天然氨基酸序列，选择甲醇酵母菌比较偏好的密码子，人工合成textilinin-1结构基因序列。

5.按照权利要求3所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中实现分泌表达时，将人工合成textilinin-1结构基因插入到甲醇酵母菌表达载体pPIC9K或pPICZα中。

6.按照权利要求3所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：在甲醇酵母菌中实现分泌表达时，利用酵母菌的α-信号肽，PHO1信号肽将重组textilinin-1移出细胞，其中在信号肽序列与textilinin-1序列之间插入KEX2蛋白酶识别序列。

7.按照权利要求2或3所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：其发酵工艺参数为：表达时pH值为3-5，表达温度为23-25℃。

8.按照权利要求2或3所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：其纯化工艺为阳离子交换和阴离子交换。

9.按照权利要求8所述重组textilinin-1的制备方法，其特征在于：选用Capto MMC和Q hp作为纯化textilinin-1的填料。

10.权利要求1所述重组textilinin-1在制造止血药物方面的用途。