[发明专利]一种检测猪伪狂犬病毒抗体的试剂盒及阻断ELISA检测方法

权利要求书

1.一种检测猪伪狂犬病毒抗体的酶联免疫试剂盒，其特征在于：包括辣根过氧化物酶标记的猪伪狂犬病毒的单克隆抗体、猪伪狂犬病毒单克隆抗体是以猪伪狂犬病毒为免疫原得到的单克隆抗体、猪伪狂犬病毒为伪狂犬病毒鄂A株；

所述的试剂盒还包括酶标板、样品稀释液、阳性对照、阴性对照、显色液A、显色液B、洗涤液、终止液；

所述的酶标板是以猪伪狂犬病毒在包被酶标板时用0.1mol/L，pH9.6的碳酸氢钠溶液作为包被缓冲液；

所述的阳性对照为猪伪狂犬病毒免疫的高免血清；

所述的阴性对照血清为未感染过猪伪狂犬病毒的健康猪血清；

所述的洗涤液为含有0.05%Tween-20的PBS缓冲液；

所述终止液为含0.25%体积比氢氟酸溶液；

所述的显色液A为含有50mg/mL过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液，显色液B液为含有0.2mg/mL TMB pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液；

所述的样品稀释液液为含2.5mg/mL的明胶的DMEM培养基。

2.根据权利要求1所述的一种检测猪伪狂犬病毒抗体的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述的单克隆抗体，其制备过程是采用杂交瘤细胞技术，用纯化的猪伪狂犬病毒鄂A株，免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT选择性培养基进行培养后，再用纯化的猪伪狂犬病毒包被板进行间接ELISA筛选，筛选的阳性细胞株经有限稀释法克隆，再用猪伪狂犬疫苗免疫的猪阳性对照血清和未感染过猪伪狂犬病毒的健康猪阴性血清进行阻断ELISA筛选，最终筛选到一株单克隆抗体，分泌此抗体的细胞株命名为PRV-GB。

3.权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒抗体的阻断ELISA检测方法，其步骤是：

1）从试剂盒中取出预包被有病毒抗原的检测板， 将稀释好的待检血清1：1稀释100μL加入抗原包被板中，同时设阴、阳性对照孔，各设2孔，每孔100μL；

2）轻轻振匀孔中样品，置37℃温育30分钟，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μL /孔，每次静置3分钟倒掉，最后一次在吸水纸上拍干；

3）每孔加酶标单抗100μL，置37℃温育30分钟，洗涤5次, 方法同步骤（2），每孔加显色液A、显色液B各一滴50μL，混匀，室温避光显色10分钟，每孔加终止液一滴50μL，15分钟内用酶标仪测定每孔OD_630nm读值。