[发明专利]检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测试剂，特别是一种检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒。

背景技术

肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae，Cpn)是1989年确定的一种严格真核细胞内寄生的原核细胞微生物，根据2004年公布的伯杰氏细菌分类学手册，已被更名为肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae，Cpn)，与鹦鹉热嗜衣原体、流产嗜衣原体、豚鼠嗜衣原体、猫嗜衣原体、兽类嗜衣原体共同组成嗜衣原体属。CPn基因组大小约1.2Mbp，由21个Pmp基因，一个III型分泌毒力因子系统，3个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，2个磷脂酶-D样蛋白基因组成。

Cpn的感染极为普遍，呈世界性的分布，主要引起人类的呼吸道感染，与人口密度呈正相关，在临床上多以隐性、持续性感染形式存在，反复迁延导致难以治疗的并发症，与哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病等心脑血管疾病的发生和发展密切相关。儿童感染率在20％左右，随着年龄的增加感染率迅速上升，青壮年可达50-60％，老年70-80％。肺炎衣原体通过呼吸道分泌物的进行人与人传播，家庭、学校、军队以及其他人口集中的工作区域可存在小范围的流行。目前，肺炎衣原体已是继肺炎链球菌和流感嗜血杆菌之后引起社区获得性肺炎(community acquired pneumonia，CAP)的主要病原体，肺炎衣原体急性感染率占23％，肺炎病人仅占感染者的小部分，70-90％为亚临床表现。肺炎衣原体感染的潜伏期为15-23天，可引起上呼吸道感染，如鼻窦炎、中耳炎和咽炎，也可引起下呼吸道感染，如支气管炎和肺炎。呼吸道感染多数表现为咽痛、发热、咳嗽，病情通常较轻，有自限性。老年肺炎衣原体肺炎病人症状可能较为严重，有时甚至致死，尤其是合并细菌性感染或存在慢性阻塞性肺疾病等时。因此，Cpn感染早期诊断对于尽早发现和治疗Cpn感染性疾病非常重要。

目前对Cpn的实验室诊断方法主要有病原体分离培养技术、核酸检测技术、血清学诊断技术等方法，国际上尚无公认的标准方法。其中病原体分离培养技术，由于CPn的抵抗力较弱，对室温或冰冻敏感，难以从临床标本中分离培养成功，一般实验室难以开展，已逐渐为其他快速检测方法所取代。补体结合试验虽然试验条件要求低，不需要特殊仪器，但具有影响因素复杂、操作步骤繁锁等缺陷。微量免疫荧光(micro-immunofluorescence，MIF)是目前CPn感染诊断最常用且最敏感的血清学方法，其结果被认为是检测CPn感染的“金标准”。其缺点是非常费时费力，MIF检测结果的可靠性在很大程度上依赖于抗原的制备和检测者的个人经验，实验操作的主观性很大，仅限于少数研究实验室使用。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用，成为最广泛应用的检测方法之一。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近年来继放射免疫分析和酶免疫分析之后发展起来的一种高灵敏度的微量测定技术。具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速等优点，作为放射性免疫分析、酶免疫分析的替代者，是当前最理想的免疫分析方法。

亲和素-生物素系统在免疫分析中的应用有多种形式，其中包括信号放大、间接包被等形式。信号放大指生物素化的抗原或抗体与酶标亲和素反应体系，其优点是利用生物素-亲和素放大效应提高检测灵敏度，缺点是亲和素的等电点较高，对聚苯乙烯等固相载体有较高的非特异性吸附，因而导致本底较高。

发明内容

本发明根据上述领域的存在的空白和需求，提供一种检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒，实验证明，具有操作简便，灵敏度高，特异性好的优点。

检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒，包括包被亲和素的微孔板，生物素化的肺炎衣原体抗原、辣根过氧化物酶标记的抗人IgM和化学发光底物，所述化学发光底物包括底物液A和底物液B，其中A液为的组成为：pH值为7.2～8.5，浓度为10～30mM的磷酸盐缓冲液中加入终浓度(W/V)为0.02～0.1％Proclin300，0.1～1.0％吐温-20和10mM过氧化脲溶液；B液为50mM的Tris-HCI缓冲液中加入终浓度(W/V)为0.02～0.1％Proclin300，1.0～3.0mM的4-碘苯酚，0.1％～1％的BSA，0.1～1％的溴化十六烷基三甲基铵，10～50mM鲁米诺溶液。