[发明专利]一种共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA/Fe3O4-OA磁性靶向纳米粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA/Fe₃O₄-OA磁性靶向纳米粒，其特征在于是将三种高效抗癌药物肿瘤坏死因子-a、干扰素-g、阿霉素和具有癌细胞靶向的叶酸连接上光活性基团，并通过光化学固定法将光活性肿瘤坏死因子-a、干扰素-g、阿霉素和叶酸通过酰胺化反应连接在纳米载体上得到的。

2.权利要求1所述共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA/Fe₃O₄-OA磁性靶向纳米粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）游离TNF-a/IFN-g/DOX/FA的制备：将TNF-a、IFN-g、DOX和FA溶解、过滤灭菌，备用；

（2）光活性TNF-a/IFN-g/DOX/FA的制备：先将TNF-a、IFN-g分别加入含N-琥珀酰亚胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液中，冰浴避光条件下搅拌反应48h，合成结束后，超滤离心30min以纯化叠氮苯基衍生物，冷冻干燥，用PBS溶解，调整浓度；将DOX加入含N-琥珀酰亚胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液中，将FA加入含4-叠氮苯胺盐酸盐的二甲基酰胺DMF/PBS溶液中，分别冰浴避光条件下搅拌反应48h，冷冻干燥，用PBS溶解，调整浓度；

（3）Fe₃O₄-OA磁性纳米粒的制备：用化学共沉淀法合成Fe₃O₄纳米粒子，并通过油酸对其进行表面改性，形成Fe₃O₄-OA磁性纳米粒； 

（4）固态共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA纳米粒子的制备：将光活性TNF-a、IFN-g、DOX、FA和Fe₃O₄-OA磁性纳米粒加入到PBS溶液中，避光反应48h后，恒温超声30min，干燥成固态，紫外照射将光活性TNF-a、IFN-g、DOX、FA共固定到Fe₃O₄-OA磁性纳米粒上，光固定完毕后，透析纯化药物，干燥； 

（5）液态共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA纳米粒子的制备：将光活性TNF-a、IFN-g、DOX、FA和Fe₃O₄-OA磁性纳米粒加入到PBS溶液中，避光反应48h后，恒温超声30min，将溶液转移至培养皿上，放置摇床，速度设置为100rpm/min，同时使用紫外灯照射，将光活性TNF-a、IFN-g、DOX、FA共固定到Fe₃O₄-OA磁性纳米粒上，光固定完毕后，透析纯化药物，干燥。

3.权利要求1所述共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA/Fe₃O₄-OA磁性靶向纳米粒在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

4.根据权利要求4所述共固定TNF-a/IFN-g/DOX/FA/Fe₃O₄-OA磁性靶向纳米粒的应用，其特征在于所述肿瘤为子宫颈癌。