[发明专利]转基因大豆子叶RNA和DNA的同步抽提方法无效
申请号: | 201110184253.5 | 申请日: | 2011-06-28 |
公开(公告)号: | CN102250884A | 公开(公告)日: | 2011-11-23 |
发明(设计)人: | 周向红;王萍;易乐飞 | 申请(专利权)人: | 淮海工学院 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 222005 江苏省连云港*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 转基因 大豆 子叶 rna dna 同步 方法 | ||
1.大豆子叶总RNA和DNA同步抽提试剂中主要包括蛋白变性剂、环境pH缓冲剂、DNase活性抑制剂。
2.根据权利要求1所述的核酸抽提试剂,其特征在于蛋白变性剂分别为SDS(十二烷基磺酸钠)、异硫氰酸胍或CTAB(十六烷基三乙基溴化铵),各成分在各方案中的用量依次为1~2%(w/v)、0.5~1.5mol/L、1~2%(w/v)。
3.根据权利要求1所述的核酸抽提试剂,其特征在于环境pH缓冲剂为Tris-Cl,防止核酸被破坏,其pH值为7.0~8.5,浓度为0.05~0.2mol/L。
4.根据权利要求1所述的核酸抽提试剂,其特征在于DNase活性抑制剂为EDTA,可螯合Mg2+或Mn2+离子,其浓度为0.01~0.1mol/L。
5.使用权利1所述的抽提试剂来同步抽提大豆子叶总RNA和DNA的方法,其抽提步骤为:使用含蛋白变性剂(如SDS、异硫氰酸胍或CTAB中的一种或多种试剂)的偏碱性(pH范围7.0~8.5)裂解液裂解样品;加入等体积的Tris饱和苯酚/氯仿(体积比=1∶1),混匀,离心后取上清;加入等体积的氯仿,混匀,离心后取上清;加入LiCl(终浓度为1~3mol/L),离心后RNA沉淀在管底;继续加入乙醇(终浓度为65%~70%(体积比)),离心后得到DNA沉淀;DNA沉淀经漂洗后,溶于含RNase A水中;向RNA溶液中加入DNase I处理,然后常规苯酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,沉淀经漂洗后,于适量RNase-free水中溶解,此步为可选做步骤。
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