[发明专利]一种芽孢杆菌微生态制剂及其液固结合发酵制备工艺

权利要求书

1.一种微生态制剂，由枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌活菌分别与固体载体组成。

2.根据权利要求1所述的一种微生态制剂，其特征在于：使用的固体培养基中含有麸皮和1%~2%（质量比）的葡萄籽提取物。

3.根据权利要求1所述微生态制剂，其制备方法包括以下步骤：

1）一级种子培养：一级液体种子培养基：蛋白胨16g/L，酵母粉10g/L，NaCl 5g/L，pH 6.0~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌分别接种于固体LB培养基平板，37℃培养24h，挑取单菌落接种于10ml液体种子培养基，于旋转式摇床200rpm，37℃培养14~18h，得到一级种子液；

2）二级种子培养：二级液体种子培养基：蛋白胨16g/L，酵母粉10g/L，NaCl 5g/L，pH 6.0~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：于1L三角瓶中装入200ml二级液体种子培养基，分别接种1%~2%上述一级种子液，37℃，200rpm培养，发酵10~18h，得到二级种子液；

3）高密度液体发酵：补料液：葡萄糖500g/L，蛋白胨200g/L；液体培养基：蛋白胨16g/L，酵母粉10 g/L，NaCl 5 g/L，pH 6.0~7.0，121℃灭菌20min；培养条件：于5~50L发酵罐中装入50%体积的液体培养基，接种培养基体积1~2%的上述二级种子液，37℃，搅拌200rpm培养6~8h后，开始流加补料液，流速50ml/min，发酵至17~24h，停止发酵，得到高密度菌体发酵液；

4）固相载体处理：固相培养基（麸皮和质量比1%~2%的葡萄籽提取物）采用微波干燥杀菌，功率10kW时间30min，水分含量≤5%；

5）液固混配：将步骤3）中所得的菌体发酵液按照重量比1~10%与步骤4）中处理后的固相培养基分别混合，充分拌匀，得到发酵曲；

6）快速固体发酵：将步骤5）中所得发酵曲在35~37℃条件下静置1~3h，进行快速固体发酵，使菌种成熟并产生芽孢，得到固体发酵产物；

7）粉碎：将步骤6）中得到的上述固体发酵产物粉碎，过40~60目筛，经过分袋包装得到成品微生态制剂。

4.根据权利要求3所述微生态制剂的制备方法，其特征在于：使用液体培养基高密度发酵枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌后，按照重量比1~10%分别与经灭菌后的固体培养基进行混匀接种，随后在35~37℃条件下进行超短期（1~3小时）固体发酵。