[发明专利]聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法

权利要求书

1.一种聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：将经过脱盐后的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子交联液顺次通过阴离子交换层析柱与多结合型离子交换层析柱串联层析系统，使内毒素结合到阴离子交换层析柱上；

之后采用添加了氯化钠的缓冲液单独对多结合型离子交换层析柱进行洗脱，收集洗脱后的目的蛋白液；

其中所述的步骤(2)中采用的阴离子交换层析柱的层析介质为琼脂糖凝胶类或聚苯乙烯类，配基为季氨基Q或二乙基氨乙基DEAE；

所述的多结合型离子交换层析柱的层析介质为高流速琼脂糖凝胶类或聚苯乙烯类或硅颗粒类，其配基为带部分疏水基团的离子交换配基；

所述的添加了氯化钠的缓冲液为Tris-HCl或醋酸钠缓冲液，缓冲液pH为4.0～7.0，缓冲液浓度为10mmol/L～100mmol/L；其中氯化钠浓度为0.1mol/L～1.0mol/L。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子交联液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐，得脱盐液；

(2)脱盐液顺次通过阴离子交换层析柱与多结合型离子交换层析柱串联层析系统，使内毒素结合到阴离子交换层析柱上，至上样完毕；

(3)采用添加了氯化钠的缓冲液单独对多结合型离子交换层析柱进行洗脱，收集洗脱后的目的蛋白液；

(4)洗脱后的目的蛋白液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐柱脱盐去除Na+、Cl-，得到高纯度的蛋白样品。

3.根据权利要求2所述的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)中的葡聚糖凝胶G-25脱盐层析柱和步骤(2)中的阴离子交换层析柱与多结合型离子交换层析柱串联层析洗脱在上样前，均采用pH6.0-8.5、浓度为10mmol/L～100mmol/L的磷酸盐缓冲液进行平衡。

4.根据权利要求2所述的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)中的葡聚糖凝胶G-25脱盐层析柱在上样前需采用pH4.0的20mM的醋酸钠缓冲液进行平衡。

5.根据权利要求1或2所述的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：所述的添加了氯化钠的缓冲液为Tris-HCl或醋酸钠缓冲液，缓冲液浓度为20mmol/L～50mmol/L；其中氯化钠浓度为0.1mol/L～0.6mmol/L。

6.根据权利要求1或2所述的聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的纯化方法，其特征在于：所述步骤(2)中的阴离子交换层析柱的层析介质层析介质为琼脂糖类，配基为季氨基Q或二乙基氨乙基DEAE；

多结合型离子交换层析柱的层析介质为高流速琼脂糖类，配基为N-苯甲基-N-甲基乙醇胺。