[发明专利]一种用于筛检食品中乐果残留的微生物方法

说明书

技术领域

本发明涉及一株青春双歧杆菌及其作为工作菌株在食品中乐果残留筛检的应用。 

背景技术

乐果是一种高效中等毒性的有机磷农药，化学名为O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯(C₆H₁₂NO₃PS₂)，因其见效快、价格低廉等优势，已在我国广泛用于蔬菜水果等农作物的杀虫、杀菌及杀螨。 

但乐果的过量使用，使其在蔬菜水果中高残留，给人们的健康带来巨大的威胁，因此我国已限量使用。2005年1月中华人民共和国卫生部和中国国家标准化管理委员会发布GB2763-2005规定在叶菜类蔬菜的最大残留限量(maximum residue limits，MRL)为1mg/kg，梨果类水果MRL为1mg/kg，核果类水果MRL为2mg/kg，柑橘类水果MRL为2mg/kg，并将检测食品中乐果残留量列为残留监控重点。 

目前，测定乐果的方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、化学发光法、酶抑制法、毛细管电泳技术(CE)等。用上述方法检测存在仪器设备复杂、样本前处理和测定操作繁琐的缺陷，不适合大量样本筛检，而且费用高昂，使其推广使用受到限制。 

微生物法突出优点是简便而经济，不需要复杂的仪器设备，在一般的实验条件下就可以进行，可以对大量样本进行快速初筛。但是，工作菌株对待测物质的敏感性和特异性高低是影响微生物法准确度和精密度的最关键问题。迄今为止，尚无筛选出对乐果农药敏感性高、特异性高的双歧杆菌工作菌株及其在食品中乐果残留筛检应用的相关报道。 

发明内容

本发明目的是提供一株对乐果敏感性高的双歧杆菌。 

本发明的双歧杆菌是：青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)LJM-001CGMCC No.4090。 

本发明的青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)LJM-001，已于2010年8月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)，保藏编号为CGMCC No.4090。 

本发明的青春双歧杆菌LJM-001分离于一名浙江省健康青年人粪便中。 

本发明的青春双歧杆菌LJM-001具有下述微生物学特征： 

(1)菌落形态：呈淡黄色或乳白色，中央隆起，边缘整齐，圆形，光滑，直径1～2mm大小。 

(2)个体形态：为不规则G+无芽孢杆菌，菌体呈杆状，稍弯曲，有的呈V型，少量呈Y型，两端着色深。 

(3)生理生化特征：D-核糖(+)；L-阿拉伯糖(+)；乳糖(+)；纤维二糖(+)；松三糖(+)；棉籽糖(+)；山梨醇(+)；淀粉(+)；葡萄糖(+)；木糖(+)；甘露糖(+)；果糖(+)；半乳糖(+)；麦芽糖(+)；海藻糖(+)；密二糖(+)；甘露醇(+)；水杨苷(+)；硝酸盐还原(-)；触酶(-)；精氨酸水解试验(-)；明胶液化反应试验(-)；吲哚试验(-)；F6PPK酶(+)。 

厌氧下生长良好，有氧环境中不生长。最适生长温度37～41℃最低生长温度25～28℃；最高43～45℃；生长最适pH 6.5～7.0；pH4.5～5.0或8.0～8.5不生长。 

本发明的青春双歧杆菌LJM-001与同属同种标准菌株相比对乐果敏感性提高了100倍以上。 

本发明的另一目的是建立一种应用青春双歧杆菌LJM-001作为工作菌株筛 检食品乐果残留的微生物法。 

本发明筛检食品乐果残留的原理是基于乐果对其敏感的青春双歧杆菌LJM-001具有明显的抑制作用，将食品样品点样双歧杆菌菌层筛检培养基上，厌氧培养18-24小时后，测定其形成的抑菌圈，根据抑菌圈的大小即可判定待测食品样品中乐果残留量是否合格。 

本发明利用青春双歧杆菌LJM-001作为工作菌株筛检食品乐果残留的微生物法，包括步骤：