[发明专利]α1,3半乳糖基转移酶基因转染材料及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医用材料领域，具体涉及一种作用于肿瘤新生血管内皮细胞的α1，3半乳糖基转移酶基因转染材料，及其制备方法和应用。 

背景技术

在我国，肿瘤发病率高，病例数相当庞大。一直以来，人们都为攻克肿瘤而不懈努力，并提出了多种治疗方法，如放疗、化疗等等，但这些治疗手段或多或少存在诸如疗效不理想、副作用大、治疗费用高等问题。因此，有必要继续对肿瘤的治疗进行深入探索，开发出更加有效的治疗手段。 

超急性排斥反应(Hyperacute Rejection，HAR)由受体内(如人、猴)预存的天然抗体与异种供体(如猪)器官血管内皮细胞上的抗原靶分子结合激活补体系统，导致补体依赖细胞毒作用或/和直接激活血管内皮细胞释放血小板激活因子引起血栓形成。其中，抗原靶分子的末端均是由α1，3半乳糖基转移酶(α1，3-galaetosyltransferase，α1，3GT)催化连接的α半乳糖残基。因此，在肿瘤的治疗中，利用HAR反应，能够有效地在肿瘤部位导致补体依赖细胞毒作用毁坏癌细胞或/和引起局部血栓形成，切断肿瘤组织的养分供给，从而达到抗肿瘤的目的。然而，α1，3GT只存在于非灵长类哺乳动物，而不存在于高级灵长目细胞内，故人类无α半乳糖抗原表达。因此，要利用前述HAR反应进行肿瘤治疗，必须寻找合适的手段将α1，3GT导入人体中。 

目前，含有α1，3GT基因质粒的材料已经被研制出来，并可以直接被注射到肿瘤部位进行相关治疗。然而，这种含有α1，3GT基因质粒的材料不具备靶向性，无法特异性地作用于待治疗的肿瘤部位，且注射有效剂量不易掌握，α1，3GT定位表达范围和水平的不确定性，决定了其难以发挥有效治疗作用。因此，有必要用适当的载体对α1，3GT基因进行装载，并对载体材料加以修饰， 使其具备针对肿瘤细胞的靶向性。 

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有含有α1，3GT基因质粒的材料不具备靶向性，无法特异性地作用于待治疗的肿瘤部位的缺陷，提供一种对新生血管内皮细胞具有良好的靶向性的α1，3GT基因转染材料及其制备方法和应用。 

本发明的目的是提供一种α1，3GT基因转染材料。 

本发明的另一目的是提供所述α1，3GT基因转染材料的制备方法。 

本发明所述α1，3GT基因转染材料包括α1，3GT基因质粒、用于装载该质粒的PEG偶联的纳米脂质体、以及通过所述PEG偶联在所述纳米脂质体上的Endoglin抗体分子；所述α1，3GT基因转染材料中，各组份的质量比为：α1，3GT基因质粒∶PEG偶联的纳米脂质体∶Endoglin抗体分子＝(0.1～0.3)∶(8.8～13.2)∶(0.8～1.2)，优选地，该比例为(0.1～0.15)∶(12.1～13.2)∶(1.1～1.2)。 

优选地，所述α1，3GT基因质粒为5.75kb真核表达质粒。 

优选地，所述装载有质粒的PEG偶联的纳米脂质体微粒的粒径可为40～200nm。更优选地，所述装载有质粒的PEG偶联的纳米脂质体微粒的粒径可为40～45nm，由于肿瘤部位新生血管相对较少且管径较细，粒径较小的脂质体微粒能够更有效地到达靶细胞，从而实现更好的治疗效果。 

优选地，所述Endoglin抗体分子可为单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)或单链抗体(single-chain variable fragment(scFv)antibody，scFv Ab)，分子量可为20～180k道尔顿。 

优选地，本发明采用的偶联剂为聚乙二醇衍生物等，所述聚乙二醇衍生物可选自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺(DSPE-PEG-maleimide)等PEG衍生物，偶联剂的PEG的分子量可为1000～4000。 

本发明所述Endoglin抗体偶联的脂质体的制备方法包括以下步骤： 

1)制备PEG修饰的磷脂薄层； 

2)重悬所述磷脂薄层，加入α1，3GT基因质粒，制得装载有质粒的PEG偶联的纳米脂质体颗粒； 

3)对所述装载有质粒的PEG偶联的纳米脂质体颗粒进行均一化和纯化； 

4)巯基化Endoglin抗体分子； 

5)将所述巯基化的Endoglin抗体分子偶联在所述装载有质粒的PEG偶联的纳米脂质体颗粒上，得所述α1，3GT基因转染材料。