[发明专利]一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物及检测方法无效
申请号: | 201110190854.7 | 申请日: | 2011-07-08 |
公开(公告)号: | CN102304510A | 公开(公告)日: | 2012-01-04 |
发明(设计)人: | 徐田军;王日昕;孙典巧;孙悦娜 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋学院 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/68 |
代理公司: | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人: | 尉伟敏 |
地址: | 316000 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 cxcr1 基因 卫星 标记 pcr 扩增 引物 检测 方法 | ||
1. 一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物,由上游引物和下游引物组成,其中,所述的上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示;下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。
2. 一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法,其特征在于,所述的检测方法包括下述步骤:
(1)利用如权利要求1所述的一对PCR扩增引物对鮸鱼不同地理群体或相同群体不同个体的基因组DNA进行PCR扩增;
(2)对PCR扩增产物进行检测,其中,SEQ ID NO.3所示为鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR引物扩增的核苷酸序列。
3. 如权利要求2所述的一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法,其特征在于,所述的步骤(1)中:其扩增体系为:总体积20μl,其中含有内含1.5mM Mg2+的1×PCR buffer,0.2μM dNTP,1U Taq聚合酶,DNA模板量为50-100ng;PCR反应程序为:95°C变性5分钟之后进入循环,95°C变性30秒,最佳退火温度30秒,72°C延伸30秒,进行30个循环,最终72°C延伸5分钟,最佳退火温度是根据设置45°C -60°C的梯度PCR确定的。
4. 如权利要求2所述的一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法,其特征在于,所述的步骤(2)中采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
5. 如权利要求2或4所述的一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法,其特征在于,所述的步骤(2)中采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,具体包括:PCR产物加入等体积变性剂,95℃变性8分钟,然后用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,恒压1000-1500V,功率200W,电泳1-2个小时,硝酸银染色系统进行检测,分析确定多态性。
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