[发明专利]一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物及检测方法

说明书

技术领域

 本发明涉及鱼类免疫器官中表达的基因序列，更具体涉及一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物以及利用该PCR扩增引物进行鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法。

背景技术

趋化因子是一类结构功能相似、具有趋化吸引和活化作用的碱基肝素结合性的小分子蛋白质，与相应的趋化因子受体结合，诱导中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、成纤维细胞等趋化游走，介导细胞在炎症部位的聚集活化及参与组织损伤修复。依据其分子N端半胱氨酸残基(Cys)的数量和排列顺序可分为CXC、CC、C、CX3C四个亚家族。

CXCR是一种介导CXC趋化因子发挥生物功能的关键受体，CXCR1属于CXCR家族中的重要成员，可与多种趋化因子结合形成非一一对应的复杂网络系统，两者结合后，通过G-蛋白变构激活下游的效应分子进行信号转导，可趋化表达CXCR1的中性粒细胞、T、B等淋巴细胞的游走、脱颗粒等一系列生物学效应，在机体的抗感染、抗病毒等多种炎症性疾病中发挥重要作用。近年来研究证实，趋化因子及其受体可增强病毒感染细胞的细胞毒活性从而抑制病毒的复制，一些趋化因子还可促进被募集活化的白细胞在病毒感染处聚集发挥清除病毒的作用。

微卫星 DNA (Microsatellites DNA)，又称短串联重复序列 (Short Tandem Repeats，STRs) 或简单重复序列 (Simple Sequence Repeats，SSRs)，一般是指以1-6个核苷酸为单位的重复序列，是近十几年才发展起来的新型分子标记技术。微卫星分子标记具有共显性遗传、重复性好、特异性强、分布广且均匀及可快速检测等优点，被广泛应用于群体遗传多样性遗传分析、种质资源保护与管理、遗传连锁图谱构建及QTL定位等领域中。抗病基因上的SSR在不同个体中表现出来的多态性可能与不同个体的抗病能力相关联，因此可以通过检测SSR多态性来分析与抗病能力的关联性，进而应用于分子辅助育种中。

鮸鱼(Miichthys miiuy)属脊索动物门(Phylum Chordata)、硬骨鱼纲 (Osteichyes)、鲈形目(Perciformes)、石首鱼科(Sciaenidae)、鮸鱼属(Miichthys)，俗称米鱼、黑鮸，主要分布于西太平洋西部，包括中国的渤海、黄海及东海，朝鲜和日本南部，为近海暖温水性中下层鱼类。鮸鱼肉鲜嫩似黄鱼，无腥味，肉质可和野生大黄鱼相媲美，是海产经济鱼类之一，也是经济价值较高的鱼类，又具有个体大、生长快、食性广等诸多优点，是近海网箱养鱼优良品种。遗传改良或品种培育是鮸鱼养殖发展的动力，研究表明，遗传变异水平与生物的生长速度、抗病能力与生产性状密切相关，因此，本发明欲建立一种筛选方式，将鮸鱼抗病基因内部的SSR标记用于快速检测多个样本，通过关联分析判断其抗病能力，应用与抗病关联分析，进一步应用于分子辅助育种。

发明内容

本发明旨在提供一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物以及利用该PCR扩增引物进行鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法，将鮸鱼抗病基因内部的SSR标记用于快速检测多个样本，通过分析判断其抗病能力，应用与抗病相关分析，确定抗病基因型，进一步应用于分子辅助育种。

为实现本发明的发明目的，发明人提供如下技术方案：

本发明首先提供了一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR扩增引物，由上游引物和下游引物组成，其中，所述的上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示；下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。

Mimi-42-E04F（上游引物）: CATTCARCACGGCTCCCTT（SEQ ID NO.1）， 

Mimi-42-E04R（下游引物）: TTCCCACTCTTATCTATCCA（SEQ ID NO.2）。

本发明还提供了一种鮸鱼CXCR1基因微卫星标记的检测方法，包括下述步骤：

（1）利用如上所述的一对PCR扩增引物对鮸鱼不同地理群体或相同群体不同个体的基因组DNA进行PCR扩增；

（2）对PCR扩增产物进行多态检测，其中，SEQ ID NO.3所示为鮸鱼CXCR1基因微卫星标记PCR引物扩增的核苷酸序列。

PCR引物扩增的核苷酸序列（SEQ ID NO.3）如下：

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