[发明专利]一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法有效
| 申请号： | 201110195020.5 | 申请日： | 2011-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN102321578A | 公开（公告）日： | 2012-01-18 |
| 发明（设计）人： | 李子牛;来琦芳;么宗利;周凯;应成琦 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海洋 贝类 血细胞 纯化 方法 | ||
1.一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，包括：
(1)将新鲜的海洋双壳贝类血液与抗凝剂混合，得混合液；
(2)将上述的混合液过滤，自然沉降，然后除去表层；再进行离心，去除上清液，最后用PBS洗两次，重悬血细胞，即得。
2.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中所述的海洋双壳贝类为菲律宾蛤仔、文蛤、青蛤、缢蛏、泥蚶、彩虹明樱蛤或扇贝。
3.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中所述的抗凝剂的配方为将NaCl 8g，Na2HPO4 2.9g，KCl 0.2g，KH2PO4 0.2g溶于蒸馏水1000ml中，然后加EDTA 5g，60℃下加热搅拌即得。
4.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(1)中所述的海洋双壳贝类血液与抗凝剂混合为按照体积比1∶1混合。
5.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述的过滤为经双层300目筛绢过滤。
6.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述的自然沉降的条件为于4℃静置12h。
7.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述的去除表层为用移液枪将表层4ml吸去。
8.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中所述的离心为于4℃离心20min，转速为300×g。
9.根据权利要求1所述的一种海洋双壳贝类血细胞的纯化方法，其特征在于：步骤(2)中PBS洗两次时于4℃离心5min，转速为300×g；重悬血细胞中血细胞浓度为106cells/ml。
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