[发明专利]使用腈水解酶突变体生产3-羟基羧酸

权利要求书

1.如SEQ ID NO：15所示的分离的核酸分子。

2.一种包含可操作地连接有合适的调节序列的权利要求1的分离的核酸分子的嵌合基因。

3.一种包含权利要求2的嵌合基因的表达盒。

4.一种包含权利要求2的嵌合基因的转化的微生物。

5.一种包含权利要求3的表达盒的转化的微生物。

6.权利要求4的转化的微生物，其中所述微生物选自：丛毛单胞菌(Comamonas sp.)、棒状杆菌(Corynebacterium sp.)、短杆菌(Brevibacterium sp.)、红球菌(Rhodococcus sp.)、固氮菌(Azotobacter sp.)、柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.)、肠杆菌(Enterobacter sp.)、梭状芽孢杆菌(Clostridium sp.)、克雷白氏杆菌(Klebsiella sp.)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、乳酸杆菌(Lactobacillus sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、糖酵母(Saccharomyces sp.)、接合酵母(Zygosaccharomyces sp.)、毕赤氏酵母(Pichia sp.)、克鲁维氏酵母(Kluyveromyces sp.)、假丝酵母(Candida sp.)、汉森氏酵母(Hansenula sp.)、杜氏藻(Dunaliella sp.)、德巴利氏酵母(Debaryomyces sp.)、毛霉(Mucor sp.)、球拟酵母(Torulopsis sp.)、甲基杆菌(Methylobacteria sp.)、芽孢杆菌(Bacillus sp.)、埃希氏杆菌(Escherichia sp.)、假单胞菌(Pseudomonas sp.)、根瘤菌(Rhizobium sp.)和链霉菌(Streptomyces sp.)。

7.权利要求6的转化的微生物，其中所述转化的微生物是一种大肠杆菌菌株，选自保藏号为ATCC 47076的MG1655、保藏号为ATCC 53911的FM5、保藏号为ATCC 27325的W3110、保藏号为ATCC 35695的MC4100和保藏号为ATCC 12435的W1485。

8.一种用于将3-羟基腈水解为3-羟基羧酸的方法，包括步骤：(a)将反应混合物水溶液中的3-羟基腈与腈水解酶催化剂接触，由此所述3-羟基腈被水解为相应的3-羟基羧酸，所述腈水解酶催化剂为权利要求1的分离的核酸分子所编码；和(b)任选地分离步骤(a)中产生的3-羟基羧酸。

9.权利要求8的方法，其中所述3-羟基腈是3-羟基戊腈或3-羟基丁腈。

10.一种用于将3-羟基戊腈水解为3-羟基戊酸的方法，包括步骤：(a)将反应混合物水溶液中的3-羟基戊腈与权利要求1的分离的核酸分子编码的腈水解酶催化剂接触，由此所述3-羟基戊腈被水解为3-羟基戊酸；和(b)任选地分离步骤(a)中产生的3-羟基戊酸。