[发明专利]一种暹罗鳄血液提取物及其提取方法和用途

权利要求书

1.一种暹罗鳄血液提取物，其特征在于该提取物是以新鲜鳄鱼动脉血为原料，通过如下步骤提取：

a.将鳄鱼血进行抗凝处理，分离血浆；

b.饱和硫酸铵法粗提免疫球蛋白；

c.DEAE-52阴离子交换层析纯化免疫球蛋白，即得。

2.如权利要求1所述的暹罗鳄血液提取物，其特征在于所述步骤a按如下方法操作：

取经检验合格的新鲜鳄鱼动脉血，用3.5％～4％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1∶8～10混合抗凝，静置0.5～1.5h，将抗凝血置于冷冻离心机，在2～10℃转速3000r/min下，离心8～15min，收集上清液，得到血浆。

3.如权利要求1所述的暹罗鳄血液提取物，其特征在于所述步骤b按如下方法操作：

1)取血浆，加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液，再逐滴加入(NH₄)₂SO₄饱和溶液，边加边搅拌，使成为30％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置0.5～1.5h；

2)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白原，得到上清液；

3)在上清液中再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使(NH₄)₂SO₄终浓度为50％，充分混合，静置1.5～2.5h；

4)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，得到蛋白沉淀；

5)于蛋白沉淀中加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液使之溶解，再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使成33％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置1.5～2.5h；

6)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，分别取蛋白沉淀，上清液；

7)重复步骤5)和6)2～3次，收集末次沉淀物即为免疫球蛋白粗提物，以PBS透析除盐，-20℃保存。

4.如权利要求1所述的暹罗鳄血液提取物，其特征在于所述步骤c按如下方法操作：

将溶解的免疫球蛋白粗提物经DEAE-52进行纯化，柱长15cm，直径1cm，盐梯度洗脱，缓冲液为pH7.2的buffer A，洗脱时NaCl浓度由0至1.0mol·L^-1，洗脱流速为0.3mL·min^-1，每管1.5mL，收集蛋白峰，即得。