[发明专利]一种暹罗鳄血液提取物及其提取方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种鳄鱼血液提取物及其提取方法和用途，属医药技术领域。

背景技术

鳄鱼血富含多种生物活性成分，是宝贵的生物资源，蕴藏着巨大的开发潜力和利用价值。我国古代称鳄鱼为“鼍龙”，又名鮀鱼(《神农本草经》)、土龙(《续博物志》)。暹罗鳄鱼是鳄鱼的一种，主要分布于泰国中部、柬埔寨、马来西亚、印度尼西亚婆罗洲(旧称加里曼丹)东部等地。

现代对鳄鱼的深入研究从未停止，鳄鱼血的研究在全球是广泛共识的。目前主要被用于三个方面的研究利用中：1、抗菌、抗病毒，2、抗肿瘤，3运动医学。研究结果表明，鳄鱼是地球上唯一不患癌症的动物，是目前爬行动物中最长寿的一种。它具有超强的生命力和‘长生不老’的生命特征。鳄鱼血具有杀菌、抗辐射、抗衰老的作用，同时，它还是一种全新的、强力的、唯一的对人体无任何伤害的超级补体。它在本世纪必定会为人类的健康做出重大的贡献。因此如何利用现有的资源开发鳄鱼血，是一项值得研究的项目。

发明内容

本发明目的在于提供一种暹罗鳄血液提取物；本发明的第二个目的是提供一种暹罗鳄血液提取物的提取方法；本发明的第三个目的是提供一种暹罗鳄血液提取物在药物制备中的新用途。

本发明目的是通过如下技术方案实现的。

本发明所述暹罗鳄血液提取物是以新鲜鳄鱼动脉血为原料，通过如下步骤提取的：

a.将鳄鱼血进行抗凝处理，分离血浆；

b.饱和硫酸铵法粗提免疫球蛋白；

c.DEAE-52阴离子交换层析纯化免疫球蛋白，即得。

所述步骤a可按如下方法操作：

取经检验合格的新鲜鳄鱼动脉血，用3.5％～4％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1∶8～10混合抗凝，静置0.5～1.5h，将抗凝血置于冷冻离心机，在2～10℃转速3000r/min下，离心8～15min，收集上清液，得到血浆。

所述步骤b可按如下方法操作：

1)取血浆，加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液，再逐滴加入(NH₄)2SO₄饱和溶液，边加边搅拌，使成为30％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置0.5～1.5h；

2)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白原，得到上清液；

3)在上清液中再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使(NH₄)₂SO₄终浓度为50％，充分混合，静置1.5～2.5h；

4)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，得到蛋白沉淀；

5)于蛋白沉淀中加0.01mol/L、pH值7.0的PBS缓冲溶液使之溶解，再加(NH₄)₂SO₄饱和溶液，使成33％(NH₄)₂SO₄溶液，充分混合后，于4℃下静置1.5～2.5h；

6)在2～10℃转速10000r/min下，离心15～25min，分别取蛋白沉淀，上清液；

7)重复步骤5)和6)2～3次，收集末次沉淀物即为免疫球蛋白粗提物，以PBS透析除盐，-20℃保存。

所述步骤c可按如下方法操作：

将溶解的免疫球蛋白粗提物经DEAE-52(中文名称：二乙氨基乙基纤维素)进行纯化，柱长15cm，直径1cm，盐梯度洗脱，缓冲液为pH7.2的buffer A(50mMPB+2M NaCL)(MPB代表醋酸盐缓冲液∶乙睛＝5∶95)，洗脱时NaCl浓度由0至1.0mol·L^-1，洗脱流速为0.3mL·min^-1，每管1.5mL，收集蛋白峰，即得。

本发明所述暹罗鳄血液提取物优选如下方法提取：

a.将鳄鱼血进行抗凝处理，分离血浆：

取经检验合格的新鲜鳄鱼动脉血，用3.8％的柠檬酸钠溶液与血液按体积比1∶9混合抗凝，静置1h，将抗凝血置于冷冻离心机，在6℃转速3000r/min下，离心10min，收集上清液，得到血浆；

b.饱和硫酸铵法粗提免疫球蛋白：