[发明专利]几乎不含亚基的糖蛋白的组合物

说明书

本申请为200810042989.7的分案申请，原申请的申请日为2008年9月17日，发明名称为“几乎不含亚基的糖蛋白的组合物及其制备方法”。

技术领域

本发明涉及蛋白质药物的纯化领域。尤其涉及含有治疗不孕症的糖蛋白水溶液的冷冻干燥方法。

背景技术

治疗不孕症的糖蛋白是一类结构接近的物质，包括绒毛膜促性腺激素(HCG)、绝经期促性腺素(HMG)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)，其中绝经期促性腺素是含有卵泡刺激素和黄体生成素且两者成一定比例(1∶0.1-1)的混合物。

HCG、FSH、LH都是由α链和β链两个亚基通过非共价键的形式结合，其中它们的α亚基完全相同，具有92个氨基酸，分子量约为14500D，第52和78位置上的天冬酰胺是发生N-糖基化的氨基酸。HCG的β亚基有145-147个氨基酸，分子量22200-39000D，其中第13、30位置上的天冬酰胺以及第121、127、132、145位置是发生糖基化的地方。FSH的β亚基由111个氨基酸组成，分子量约为18000D，其中第7和24位置上的天冬酰胺是发生N-糖基化的氨基酸。而LH的β亚基由121个氨基酸组成，分子量约为14800D。

临床上HCG、HMG、FSH、LH主要用于治疗不育症以及体外辅助生殖。它们可以从特定妇女(孕期或绝经期)的尿液中提取出来，也可通过DNA重组技术而制备。

治疗不孕症的糖蛋白的第一代产品是上世纪60年代Serono公司的Profasi(HCG)、Pergonal(HMG)，它们的纯度都较低，含有大量杂质。上世纪80年代之后，Serono公司分别推出了Metrodin-HP，它是一种杂质含量很低的高纯度的FSH制剂；后来又推出利用DNA重组技术生产的Gonal-F(rFSH)、Luveris(rLH)等，另外，Ferring公司也推出了高纯度绝经期促性腺素-Menopur。

由此可见，目前市场上都在致力于高纯度糖蛋白的开发和应用，来替代普通的低纯度产品，以克服普通低纯度产品中的杂蛋白造成的过敏反应。但是，通过各种纯化手段获得的高纯度糖蛋白都要经过两个阶段，即原料药阶段和制剂成品阶段。这两个阶段可以是固体形式，也可以是液体形式。一般应尽量采用固体形式而不采用液体形式，对于原料药来说，液体形式不容易保存和运输，因为液体形式必须保存在-20℃以下，否则糖蛋白容易失活；液体形式由于会遇到冻结-溶解过程，甚至是反复的冻结-溶解过程，更容易导致糖蛋白失活；液体形式还会遇到包装容器在低温下接近脆性点容易破裂的危险等。而对于制剂成品来说，液体形式除了不容易运输外，还遇到液体形式的糖蛋白药物的稳定性较差，而且必须要加防腐剂才能保证在有效期内微生物不会滋生，如公开号为CN1309567A的专利申请。

而固体形式的获得主要是通过冷冻干燥的手段，但高纯度的糖蛋白在冷冻干燥的过程中很容易发生变性失活，其变性失活主要表现为完整分子降解成α链和β链两个亚基，而这些亚基也是杂质，它们是没有疗效或可能产生副作用的异构物，因此目前的高纯度糖蛋白的冻干制剂在投料时都要多加10-30％的量，以抵消冷冻干燥过程的失活情况，而且成品中还会产生一定量的亚基，降低了产品的纯度。造成降解失活的原因，一方面是原辅料的配方不合理，一方面是冷冻干燥的工艺需要完善。

因此，本领域迫切需要开发出一种适合治疗不孕症的糖蛋白的冷冻干燥方法，并由此获得几乎不含亚基的糖蛋白药物。

发明内容

本发明旨在提供一种含有糖蛋白的水溶液的冷冻干燥方法，并由此获得几乎不含亚基的糖蛋白药物。

在本发明的第一方面，提供了一种亚基含量不超过10wt％的糖蛋白的组合物。

在另一优选例中，所述的糖蛋白选自绒毛膜促性腺激素、绝经期促性腺素、卵泡刺激素、黄体生成素、或其混合。

在另一优选例中，所述绒毛膜促性腺激素是人尿来源和/或重组的人绒毛膜促性腺激素、或其变体；所述绝经期促性腺素是人尿来源和/或重组的人绝经期促性腺素、或其变体；所述卵泡刺激素是人尿来源和/或重组的人卵泡刺激素、或其变体；所述黄体生成素是人尿来源和/或重组的人黄体生成素、或其变体。

在另一优选例中，所述糖蛋白的组合物的亚基含量不超过5wt％。

在另一优选例中，所述的组合物是冷冻干燥粉末。

在本发明的第二方面，提供了一种含糖蛋白水溶液的冷冻干燥方法，所述的方法包括步骤：