[发明专利]一种从链霉菌发酵液中提纯子囊霉素的方法

权利要求书

1.一种从链霉菌发酵液中提纯子囊霉素的方法，其特征在于采用发酵液过滤、菌丝体超声破碎提取、大孔树脂吸附、硅胶柱层析和结晶技术得到子囊霉素纯品。

2.根据权利要求1所述的方法，其具体步骤如下：

1)将链霉菌发酵液过滤，分别收集滤液及菌丝体；菌丝体采用超声波辅助提取3～5次，控制体系pH值，收集提取液，与滤液合并，得合并液；

2)将步骤1)中得到的合并液，经微滤膜过滤后，微滤透过液进入超滤膜过滤，得滤液，转移到装有大孔树脂的床层进行吸附；并用4～5倍大孔树脂柱床体积的有机溶剂进行冲洗，1～3倍的大孔树脂柱床体积的有机溶剂进行解吸，控制柱床温度，收集解吸液；

3)将步骤2)收集的解吸液真空浓缩，旋干，得油状物；

4)将步骤3)中得到的油状物用有机溶剂溶解，油状物质量与有机溶剂体积比1∶20～1∶30g/ml，上样层析硅胶柱，上样液进入层析硅胶后用4～6倍硅胶体积的洗脱剂洗脱，收集含子囊霉素的活性组分；

5)将步骤4)收集的含子囊霉素的活性组分经真空浓缩旋干，并用其质量体积比为1∶10～1∶20g/ml的有机溶剂溶解，将温度降低到0～10℃，保温使子囊霉素结晶析出；冷冻离心，得到子囊霉素一次结晶；

6)将步骤5)得到的子囊霉素晶体用有机溶剂搅拌溶解后，加入该溶解液5～10倍体积的结晶溶剂静置，结晶得到子囊霉素。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤1)中超声波辅助提取中所用有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯或乙醇；菌丝体与有机溶剂质量体积比为1∶10～1∶15g/ml；超声频率为25～50KHz；功率为100～200W；超声提取时间为10～45分钟；控制体系PH值为6～9。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的步骤2)中冲洗时，有机溶剂为体积浓度50％～60％乙醇水溶液或50％～60％甲醇水溶液；解吸时，有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮或甲醇；控制柱床温度为20～35℃。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤4)中有机溶剂与洗脱剂均为体积比10∶1～15∶1的乙酸乙酯和甲醇混合溶液。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤5)中有机溶剂为乙酸乙酯、丙酮或甲醇；降温速率为10～20℃/h；结晶时间为10～20小时。 

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤6)中搅拌溶解的有机溶剂为丙酮、甲醇或乙酸乙酯；晶体与有机溶剂质量体积比为1∶25～1∶45g/ml；搅拌温度为25～35℃；结晶溶剂为环己烷或正己烷；结晶溶剂的加入时间为5～20分钟；结晶温度为15～25℃；结晶时间为3～10小时。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤3)和步骤5)中真空浓缩的温度为30～40℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述链霉菌发酵液中的链霉菌，其分类命名为链霉菌，菌种的拉丁学名是Streptomyces sp.，参据的微生物：NJYH2618，保藏日期是2008年5月26日，保藏中心登记入册编号是CGMCCNO.2519。