[发明专利]利用木糖代谢产丁二酸大肠杆菌基因工程菌的构建方法无效
| 申请号： | 201110200742.5 | 申请日： | 2011-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN102296082A | 公开（公告）日： | 2011-12-28 |
| 发明（设计）人： | 姜岷;刘嵘明;梁丽亚;马江锋;陈可泉;韦萍 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 樊文红 |
| 地址： | 210009 江苏省南京市鼓楼*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 代谢 产丁二酸 大肠杆菌 基因工程 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用木糖代谢产丁二酸大肠杆菌基因工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）以缺乏乳酸脱氢酶基因，丙酮酸甲酸裂解酶基因活性的大肠杆菌菌株为出发菌株，敲除其中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因，得到同时缺乏ldhA、pflB和PPC的感受态菌株；
(2) 单独纯化扩增出磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶基因，或者纯化扩增出磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶基因，以及选择自苹果酸酶基因、苹果酸脱氢酶基因或丙酮酸羧化酶基因这三种基因中的一种，构建得到单独过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶，或者过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶，以及选择自苹果酸酶、苹果酸脱氢酶或丙酮酸羧化酶这三种酶中的一种的表达质粒；
（3）将步骤（2）所述的质粒导入步骤（1）得到的感受态菌株，获得阳性转化子；
（4）利用步骤（3）的阳性转化子单独过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶，或者过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶，以及选择自苹果酸酶、苹果酸脱氢酶或丙酮酸羧化酶这三种酶中的一种，恢复其在厌氧条件下代谢木糖的能力，得到可利用木糖代谢产丁二酸基因工程菌。
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