[发明专利]肠出血性大肠杆菌的主要血清型O157核酸筛查方法

说明书

技术领域

本发明属于疫病检验领域，具体涉及一种基于环介导等温扩增技术的肠出血性大肠杆菌的主要血清型O157核酸筛查方法。主要应用于肠出血性大肠杆菌主要血清型O157的核酸检测。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(EHEC)是大肠杆菌的一个亚型，EHEC分为157、26、111等血清型，主要致病菌株为O157:H7，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。2011年5月，德国爆发肠出血性大肠杆菌病。据罗伯特·科赫研究所6月28日公布的最新疫情通报，德国一个多月来肠出血性大肠杆菌感染病例累计达3901例，截至27日，死亡患者已达47人。报告还指出，本次德国疫情与以往产志贺毒素大肠杆菌造成的疫情不同，其特点为：一、感染病例中溶血性尿毒综合征重症病例所占比例达25％，远高于以往疫情；二、溶血性尿毒综合征病例中成人患者约占89％，且多数是女性。而以往产志贺毒素大肠杆菌感染者多数是儿童，且没有明显性别差异；三、以往疫情致病菌大多数是血清型O157型大肠杆菌，这次则是O104型；四、本次感染的潜伏期平均为8天，以往是3到4天。

自1982年美国首次发现因大肠杆菌O157:H7致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本、澳大利亚、南非等多个国家引起发病。1989年美国密苏里州240余人因饮用水感染，死亡4人，1995年美国西海滨因“汉堡包”造成700余人发病，4人死亡。1992年南非由于饮水和粮食不卫生造成上千人发病。日本，于1984年首次出现该病感染，1990～1995年共发生8起由该菌引起的中毒事件，1996年5～8月间，日本包括冈山、广岛、名古屋、神户、东京等在内的30多个都、府、县的小学、保育学校及幼儿园中多次发生集体食物中毒，发病人数达到9000人以上，以致上百所小学停课、幼儿园关门。我国在1987年就发现由此菌引起的散在感染，近年来已陆续有十多个省份在食品、家禽、家畜、昆虫和腹泻病患者中检出该致病菌。美国，于2006年9月中旬爆发“毒菠菜”事件，10月26，洛杉矶电，美国加利福尼亚州卫生官员26日说，调查表明，“毒菠菜”污染事件可能是因为野猪将大肠杆菌带到了菠菜田里。加州卫生服务部的调查人员于当天晚间召开新闻发布会说，自9月中旬以来，已有204人因食用加州东部萨利纳斯谷地生产的“毒菠菜”而患病，其中3人死亡。迄今美国有26个州发现食用“毒菠菜”的患者，加拿大也有一个省被殃及。

大肠杆菌通常存在于动物的肠内，并通过粪便物传播。未煮过的农产品、未消毒的原料奶、未经高温灭菌的果汁以及被污染的水和肉类中，都容易寄生这种细菌，但并非每种大肠杆菌都会致病。O157:H7感染包括无症状感染，轻度腹泻，出血性结肠炎及其并发症。感染O157:H7后潜伏期一般为3～4天，长者达10天，临床症状轻重不一，轻者无症状或仅有轻度腹泻。及上呼吸道症状，大多在5～10天内痊愈，典型病例表现为突然发生的剧烈腹痛和非血性腹泻，数天后出现血性腹泻，无粪质，不发热或仅有轻度发热，血白细胞计数增多，感染7天后，可发生严重的溶血性尿素综合症(HUS)，发生率约3％～10％，暴发流行时比例稍低，HUS表现为在腹痛、腹泻症状好转后突然出现溶血性贫血症状(如酱油尿，进行性贫血，黄疸等)、肾功能衰竭症状(水肿、少尿或无尿，尿毒症状，高血钾等)和出血症状(便血、呕血、硬脑膜下出血或视网膜出血，皮肤伤亡斑少见)。由于HUS存在广泛的微血管血栓形成，可导致多脏器多系统损害如脑、心血管系统、肝、胰等，30％病例可发生脑功能不全，(如各种意识障碍，活动障碍和肌张力异常)40％病例有轻而短暂的肝损害。心血管系统受损可表现为高血压，急性期绝大多数有轻度可逆性、易控制的高血压，与肾素活性相关性不大，循环内皮素可能起重要作用。并发HUS的病死率较高，早期达30％～50％，近年来由于诊断、治疗水平的提高死亡率大大下降。另一严重的并发症是栓塞性血小板减少性紫癜(TTP)，临床表现与HUS相似，但神经系统症状较多而肾脏损害较少，TTP死亡率亦可高达30％～50％.