[发明专利]一种表达Nectin-1基因胞外区片段的PK-15细胞系及其构建方法无效
| 申请号： | 201110203504.X | 申请日： | 2011-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN102329776A | 公开（公告）日： | 2012-01-25 |
| 发明（设计）人： | 刘正飞;商琦;高觉婧;贾贵英;陈焕春 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/85;C12R1/91 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 王和平 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 nectin 基因 胞外区 片段 pk 15 细胞系 及其 构建 方法 | ||
1.一种表达Nectin-1基因胞外区片段的PK-15细胞系，其特征在于该细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号：CCTCC NO：C201134，保藏命名：猪肾细胞PK15-nectin-1-ecto。
2.一种如权利要求1所述的表达Nectin-1基因胞外区片段的PK-15细胞系的构建方法，其步骤如下：
1)将猪肝脏组织中的Nectin-1胞外区完整编码区序列克隆到慢病毒核心载体pLenti-7.3CA质粒，构建pLenti7.3CA-nectin-1-ecto重组质粒；
2)将pLenti7.3CA-nectin-1-ecto重组质粒和另外三个辅助质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共同转染包装细胞人胚肾细胞293FT，收集细胞上清、超离获得HIV慢病毒粒子；
3)将步骤2)中获得的慢病毒粒子用低速离心的方法转导PK-15细胞，得到能够稳定表达猪pLenti7.3CA-nectin-1-ecto的PK-15细胞系PK15-nectin-1-ecto。
3.如权利要求1所述的一种表达Nectin-1基因胞外区片段的PK-15细胞系，其特征在于该细胞系含有α疱疹病毒的受体蛋白Nectin-1基因胞外区片段，能够有效的应用于抑制猪伪狂犬病病毒的增殖。
4.一种插入α疱疹病毒的受体蛋白Nectin-1基因胞外区片段的真核表达质粒pLenti7.3CA-nectin-1-ecto，其特征在于该质粒保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号：CCTCC NO：M2011198，保藏命名：Escherichia coli pLenti7.3CA-nectin-1-ecto。
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