[发明专利]桑葛制剂中总黄酮类和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及质量检测方法

权利要求书

1.一种桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

a)将所述桑葛制剂制备成液相分离用桑葛制剂溶液；

b)总黄酮类成分指纹图谱的构建：

将所述桑葛制剂溶液注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱仪，紫外检测器波长为250nm；柱温为20-40℃；以乙腈为流动相A，以0.3％醋酸为流动相B进行梯度洗脱，得到所述总黄酮类成分指纹图谱；以及

c)总生物碱类成分指纹图谱的构建：

将预定量的所述桑葛制剂溶液置于容器中，将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入所述容器中，水浴下反应；再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑葛制剂溶液，过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪，其中，

所述高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，荧光检测器激发波长为254nm，发射波长为309nm，柱温为20-40℃，以乙腈为流动相C，0.1％醋酸为流动相D进行梯度洗脱，得到所述总生物碱类成分指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤b)的梯度洗脱程序如下：

0～20分钟流动相A体积比保持为10.5％，流动相B体积比保持为89.5％；

20～60分钟流动相A体积比由10.5％线性上升到40％，流动相B体积比由89.5％下降到60％；

60～62分钟流动相A体积比由40％线性下降到10.5％，流动相B体积比由60％上升到89.5％；

62～70分钟流动相A体积比保持为10.5％、流动相B体积比保持为89.5％，得到所述总黄酮类成分指纹图谱。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤c)的梯度洗脱程序如下：

0～50分钟，所述流动相C体积比由30％上升到35％，所述流动相D体积比由70％下降到65％；

50～60分钟，所述流动相C体积比保持为35％，所述流动相D体积比保持为65％；

60～61分钟，所述流动相C体积比由35％上升到100％，所述流动相D体积比由65％下降到0％；

61～70分钟，所述流动相C体积比保持为100％，所述流动相D体积比保持为0％；

70～71分钟，所述流动相C体积比由100％下降到30％，所述流动相D体积比由0％上升到70％，得到所述总生物碱类成分指纹图谱。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤b)进一步包括将葛根素加入水中制得葛根素参照物溶液的步骤，所述葛根素参照物溶液与所述桑葛制剂溶液同时注入所述液相色谱仪。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤c)进一步包括将1-脱氧野尻霉素盐酸盐溶入水中制得1-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液的步骤，所述1-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液与所述桑葛制剂溶液同时注入所述高效液相色谱仪。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述总黄酮类成分的对照指纹图谱具有17个共有指纹峰，相对保留时间分别为：

1号峰为0.487±0.009，2号峰为0.536±0.004，3号峰为S峰，为1.000±0.000，4号峰为1.099±0.030，5号峰为1.217±0.002，6号峰为1.308±0.001，7号峰为1.890±0.002，8号峰为2.268±0.008，9号峰为2.314±0.006，10号峰为2.445±0.010，11号峰为2.507±0.028，12号峰为2.549±0.010，13号峰为2.722±0.012，14号峰为2.771±0.012，15号峰为2.930±0.007，16号峰为3.423±0.019，17号峰为3.529±0.017。