[发明专利]桑葛制剂中总黄酮类和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药材的质量检测领域，具体而言，涉及一种对桑葛制剂中总黄酮类成分和总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及对桑葛制剂的质量检测方法。

背景技术

桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮，性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利水消肿的功能，主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。葛根为豆科多年生藤本植物野葛Pueraria lobata(Willd)Ohwi的干燥根，是中医临床常用药物，具有扩张冠状动脉、减慢心率、降低心肌耗氧量、改善心、脑血液循环等作用。

在现有技术中，人们将桑白皮和葛根两味药材混合制成了桑葛制剂，并将其应用到降脂、脑卒中等中药组合物的制备中。由于桑葛制剂在中药组合物中的重要作用，所以其质量检测也一直受到人们的关注。现有的含量测定方法中仅以测定单一活性成分葛根素和1-脱氧野尻霉素(DNJ)为指标，这一方法虽然能够快速地检测出上述两种主要成分，但由于桑葛制剂中还存在着大量其他有效成分，而使得该药物在临床应用中的有效性和安全性无法得到较好的监控。

发明内容

为了解决上述现有桑葛制剂检测方法不能全面反映总黄酮类和总生物碱类活性成分的含量，无法控制桑葛制剂质量的问题，本发明提供了一种桑葛制剂总黄酮类和总生物碱类活性成分的指纹图谱构建方法。

本发明提供的桑葛制剂总黄酮类成分和总生物碱类活性成分指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

a)将桑葛制剂制备成可用于液相色谱分离的桑葛制剂溶液；

b)总黄酮类指纹图谱的构建

将桑葛制剂溶液注入液相色谱仪，紫外检测器的波长为250nm；柱温为20-40℃；以乙腈为流动相A，以0.3％醋酸为流动相B进行梯度洗脱，得到总黄酮类指纹图谱；以及

c)总生物碱类成分指纹图谱的构建

称取预定量的桑葛制剂溶液，分别将硼酸盐缓冲液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入该桑葛制剂溶液，水浴下进行反应；再依次将甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到上述桑葛制剂溶液，过滤后取续滤液注入高效液相色谱仪，荧光检测器的激发波长为254nm，发射波长为309nm，柱温在20-40℃的范围内；其中，高效液相色谱仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相C，0.1％醋酸为流动相D进行梯度洗脱，，得到总生物碱类成分指纹图谱。

进一步地，步骤b)的梯度洗脱的程序如下：

0～20分钟流动相A体积比保持为10.5％，流动相B体积比保持为89.5％；

20～60分钟流动相A体积比由10.5％线性上升到40％，流动相B体积比由89.5％下降到60％；

60～62分钟流动相A体积比由40％线性下降到10.5％，流动相B体积比由60％上升到89.5％；

62～70分钟流动相A体积比保持为10.5％、流动相B体积比保持为89.5％，得到总黄酮类成分指纹图谱；

进一步地，步骤c)的梯度洗脱程序如下：

0～50分钟，流动相C体积比由30％上升到35％，流动相D体积比由70％下降到65％；

50～60分钟，流动相C体积比保持为35％，流动相D体积比保持为65％；

60～61分钟，流动相C体积比由35％上升到100％，流动相D体积比由65％下降到0％；

61～70分钟，流动相C体积比保持为100％，流动相D体积比保持为0％；

70～71分钟，流动相C体积比由100％下降到30％，流动相D体积比由0％上升到70％；

进一步地，步骤b)包括通过将葛根素加入水中制备葛根素参照物溶液的步骤，上述葛根素参照物溶液与桑葛制剂溶液同时注入液相色谱仪。

进一步地，步骤c)包括将1-脱氧野尻霉素盐酸加入水中制得1-脱氧野尻霉素盐酸参照物溶液的步骤；制得的1-脱氧野尻霉素盐酸盐参照物溶液与桑葛制剂溶液同时注入高效液相色谱仪。

进一步地，总黄酮类成分的对照指纹图谱中具有17个共有指纹峰，相对保留时间分别为：