[发明专利]一种发酵生产利普司他汀的方法及其培养基组份

权利要求书

1.一种发酵生产利普司他汀的方法，包括毒三素链霉菌或其衍生物的斜面菌种的制备、摇瓶种子液的制备、种子液的制备以及发酵培养，其特征在于在发酵培养中，在发酵培养基中的甘油消耗殆尽后，开始流加补入亚油酸和亮氨酸溶液，其中亮氨酸溶液的浓度为70g/L，pH为11，二者的补料流速均为0.2～0.5g/L/h，单位g/L/h是克/升/小时；在发酵接种后至115小时，补料速度进行调整，补料速度在0.2～0.5g/L/h；在接种后至70小时，一次性补入灭菌的酵母提取物以及甘油，使培养基中酵母提取物以及甘油基质浓度在5～10g/L的水平。

2.根据权利要求1所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述菌种为毒三素链霉菌ACCC41038或其衍生物。

3.根据权利要求1或2所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于它包括以下步骤：

a.斜面菌种的制备：将冻干的菌种用无菌水稀释后涂布装有固体培养基的斜面上，温度28℃，湿度40～60％，培养8～10天，产孢后加无菌水制成孢子悬浮液；

b.摇瓶种子液制备：将斜面孢子接种摇瓶种子培养基，250rpm，温度28℃，培养20～30小时；

c.种子液的制备：将步骤b中培养好的摇瓶种子接种到储有种子培养基的种子罐中，接种量为种子培养基体积的0.1～0.8％，在28℃下通气量0.8VVM～1.0VVM，单位VVM是体积/体积/分钟，罐压0.04～0.07MPa的条件下，培养20～40小时；

d.发酵培养：将步骤c中培养好的菌种接种到储有发酵培养基的发酵罐中，接种种子液的量占发酵培养基和种子液体积的5～10％，在温度为28℃，通气量0.6VVM～1.1VVM，罐压0.06～0.08MPa，发酵过程中pH控制在6.5～7.5范围内，培养160～190小时。

4.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤a中固体培养基的成分和含量为：葡萄糖2～8g/L，麦芽提取物2～8g/L，酵母提取物4～10g/L，琼脂10～20g/L，pH为6.9～7.4。

5.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤b中摇瓶种子培养基成分和含量为：甘油10g/L，麦芽提取物10g/L，酵母提取提取物5g/L，脱脂豆粉20g/L，pH为6.0～6.5。

6.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤c中种子培养基使用脱脂豆粉作为主要氮源。

7.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤c中种子培养基成分和含量为：甘油10g/L，麦芽提取物10g/L，酵母提取物5g/L，脱脂豆粉20g/L，pH为6.0～6.5。

8.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤d中发酵培养基使用甘油、豆油和脱脂豆粉为主要碳源或氮源。

9.根据权利要求3所述的发酵生产利普司他汀的方法，其特征在于所述的步骤d中发酵培养基成分和含量为：甘油10～20g/L，脱脂豆粉20～40g/L，豆油10～20g/L，消泡剂2～5g/L，pH为6.7～7.0。

10.一种发酵生产利普司他汀的发酵培养基，其特征在于其成分和含量为：甘油10～20g/L，脱脂豆粉20～40g/L，豆油10～20g/L，消泡剂2～5g/L，pH为6.7～7.0。