[发明专利]检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括用于扩增BVDV 5’UTR的引物对。

2.如权利要求1的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于所述引物对的上游引物序列为5’-GAGTACAGGGTAGTCGTCAGTGG-3’，下游引物序列为5’-CTCTGCAGCACCCTATCAGG-3’。

3.如权利要求2的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括用于检测扩增产物的TaqMan探针。

4.如权利要求3的荧光定量RT-PC检测试剂盒，其中所述探针的序列为5’-AGATGCCACGTGGACGAGGGC-3’，5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团BHQ1。

5.如权利要求4的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于所述引物对和TaqMan探针被包括在RT-PCR反应液中，所述RT-PCR反应液包括以下组分：1×RT-PCR缓冲液、1mMdNTP混合物、0.1μM TaqMan探针、0.2μM上游引物和0.2μM下游引物。

6.如权利要求5的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其中所述试剂盒还包括如下组分：RNA提取试剂、DEPC水、DNA聚合酶、反转录酶、阳性对照和阴性对照。

7.如权利要求1-6任一项的荧光定量RT-PCR检测试剂盒的应用，其特征在于该试剂盒使用时包括如下步骤：提取样品的RNA；一步法PCR，利用反转录过程将RNA反转录成cDNA，同时进行荧光定量PCR；对数据进行处理和分析；其中所述应用不用于诊断目的。

8.如权利要求7的应用，其特征在于用于临床及科研领域，包括对BVDV感染进行快速定量检测，以及对牛血清、牛血白蛋白、牛睾丸细胞源猪瘟兔化弱毒活疫苗等生物制品的BVDV污染监测。

9.不用于诊断目的的用于检测BVDV的方法，其特征在于包括应用荧光定量RT-PCR方法检测待测样本中是否存在BVDV的RNA的步骤，其中所述RT-PCR方法应用了以下引物对和TaqMan探针：序列为5’-GAGTACAGGGTAGTCGTCAGTGG-3’的上游引物，序列为5’-CTCTGCAGCACCCTATCAGG-3’的下游引物，以及序列为5’-AGATGCCACGTGGACGAGGGC-3’的TaqMan探针。

10.不用于诊断目的的用于检测BVDV的方法，其特征在于包括应用权利要求1-6任一项的荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒检测待测样本中是否存在BVDV的RNA的步骤。