[发明专利]银鲳精子冷冻保存方法

权利要求书

1.一种银鲳精子冷冻保存方法，其特征在于：保存方法的步骤是：

(1)精液采集：选择性腺发育成熟的雄性亲鱼，采用腹部挤压法获取精液，将活动率85％以上的精液用于精子冷冻，精液采集后置于冰上保存；

(2)基础液选择：配制方法：NaCl7.5g/L，NaHCO₃0.25g/L，KCl0.38g/L，CaCl₂·2H₂O0.18g/L，MgCl₂0.22g/L，NaH₂PO₄0.22g/L，D-葡萄糖1g/L，以1N HCl调节pH至7.3，备用；

(3)抗冻剂选择：将上述基础液终浓度的10-15％二甲基亚砜作为抗冻保护剂；

(4)精子的稀释与平衡：将精液与抗冻剂按照体积比1∶1混合，在冰上平衡4-5min；

(5)精子冷冻：将平衡后的精液分装入冻存管中，降温冷冻保存；

(6)精子解冻：先将冻存管提至罐口，在液氮蒸汽中停留1.5-2.5min，然后将冷冻管取出迅速置于25-30℃水浴中解冻80-100s，取出置于室温下至完全融化；

(7)精子激活后的活力检验：室温条件下，以自然海水激活精子，检查精子活力，统计精子快速运动时间。

2.根据权利要求1所述的银鲳精子冷冻保存方法，其特征在于，所述步骤(5)中的精子降温冷冻保存采用三步降温法，即液氮罐颈部-20℃停留3min，液氮面上5cm处-150℃停留5min，再直接投入液氮中保存。