[发明专利]一种鲜土贝母提取物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法，特别涉及一种鲜土贝母二氯甲烷提取物及其制备方法，属于医药生物技术领域。

背景技术

土贝母为葫芦科植物土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franquet]的干燥块茎，是一种传统中药。其又被称为土贝、大贝母、地苦胆、草贝等。主产于河南、陕西、山东等地。临床具有清热解毒、消肿散结之功效。土贝母所含的主要成分有脂肪酸、甾醇、三萜皂苷等。分离出来的多种化学成分经实验表明具有抗肿瘤作用。据文献调查，所进行的理化实验材料多为土贝母干品，而用土贝母鲜品进行研究者甚少。

发明内容

本发明目的在于提供一种鲜土贝母提取物，本发明另一目的在于提供该提取物的制备方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明鲜土贝母提取物的制备方法包括如下步骤：

取土贝母鲜品800～1200重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用6～10重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用6～10重量倍的二氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收二氯甲烷至干，在50～70℃状态下，真空干燥，得二氯甲烷提取物；

本发明鲜土贝母提取物的制备方法可以优选为如下步骤：

取土贝母鲜品1000重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用8重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用8重量倍的二氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收二氯甲烷至干，在60℃状态下，真空干燥，得二氯甲烷提取物；

本发明鲜土贝母提取物制备方法还可以优选为如下步骤：

取土贝母鲜品900重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用9重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用9重量倍的二氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收二氯甲烷至干，在55℃状态下，真空干燥，得二氯甲烷提取物；

本发明鲜土贝母提取物的制备方法还可以优选为如下步骤：

取土贝母鲜品1100重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用7重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用7重量倍的二氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收二氯甲烷至干，在65℃状态下，真空干燥，得二氯甲烷提取物；

取本发明土贝母二氯甲烷提取物，加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂、冻干粉针剂或注射制剂。

上述本发明药物组合物及其制备方法中的重量份与体积份的关系为g/ml的关系。

本发明首次以鲜土贝母为原料，通过提取富集及柱层析的方法富集特定洗脱组分。该发明方法提取的有效部位提取物成分纯度高，成分相对清晰，富集方法简单，重复性好。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例一：MTT法测定

取对数生长期的肿瘤细胞，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液调配成浓度为7000个/ml，接种于96孔板，每孔加入200μL。细胞贴壁后，分别加入50μL土贝母鲜品二氯甲烷提取物(实施例1制备)药物溶液，试药按浓度递增原则各设5个不同的浓度，终浓度分别为0.1、1、10，20，40g/ml，每种药的每种浓度均设10个平行孔，空白阴性对照组为等容积的RPMI-1640培养基。在37℃、5％CO₂条件下培养48h。每孔加入20μL浓度为5mg/ml的MTT溶液，振荡混匀后继续培养4h。弃去上清液，每孔加入150μL DMSO溶液，轻轻振荡10分钟使MTT甲瓒沉淀溶解，用酶标仪(测定波长为570nm)测定其OD值，计算抑制率，求IC50、IC90。按下列公式计算药物对肿瘤细胞增殖的抑制率。

抑制率(％)＝[1-(药物组OD值-空白组OD值)/(对照组-空白组OD值)]*100％

为了证明实验结果的客观性及可重复性，我们进行了三次重复实验，结果见表一和表二。

表一该药物对MCF-7细胞体外抑制作用结果

注：单位为μg/mL。

表二阳性药物对MCF-7细胞体外抑制率汇总

注：单位为％。

根据表一确定实验结果如下：