[发明专利]具有增强的生物学效用的干扰素‑β的聚合物缀合物

权利要求书

1.一种增加非糖基化干扰素β的体外生物效力的方法，包含在存在十二烷基硫酸钠(SDS)下选择性地偶联一种聚(乙二醇)(PEG)至该干扰素β的氨基末端氨基酸上，以获得经修饰的干扰素β，

其中该氨基-末端氨基酸位于该干扰素β的受体-结合功能域的远端，

其中该PEG具有的分子量为10kDa－30kDa，其中所述增加的体外生物效力是在响应于干扰素β的细胞培养测定法中测量的增加的抗增殖的效力，以及

其中所述偶联包括

(a)(i)混合所述干扰素β和所述PEG的醛衍生物以形成席夫碱，和(ii)在一定条件下用温和的还原剂，还原所述席夫碱，从而形成仲胺键，其中所述经修饰的干扰素-β的体外生物效力是所述偶联前所述干扰素-β的体外生物效力的2.5倍－6倍，并且其中所述选择性偶联得到90％的所述PEG缀合于氨基-末端氨基酸；或者

(b)(i)在对所述干扰素-β的至少一个必需的甲硫氨酸残基具有最小的氧化反应的条件下，用高碘酸盐将所述干扰素-β的N-端丝氨酸或苏氨酸残基氧化分解成醛类，和(ii)将所述醛与所述PEG的肼基甲酸酯衍生物偶联，其中所述经修饰的干扰素-β的体外生物效力是所述偶联前所述干扰素-β的体外生物效力的6－10倍。

2.权利要求1的方法，其中该干扰素β具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

3.权利要求1的方法，其中在(a)中该PEG共价偶联至该氨基末端氨基酸的α氨基上。

4.权利要求3的方法，其中该PEG与该α氨基的共价偶联是经由仲胺连接的。

5.权利要求1的方法，其中该PEG具有的分子量为18kDa－22kDa。

6.权利要求5的方法，其中该PEG具有的分子量为20kDa。

7.权利要求1的方法，其中该PEG具有的分子量为30kDa。

8.包含缀合物和去污剂的组合物，所述缀合物由权利要求1的方法产生。

9.一种药物组合物，包含一种或多种由权利要求1的方法产生的缀合物及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

10.包含去污剂和缀合物的组合物，其中所述缀合物包含在其氨基末端氨基酸处共价偶联至PEG上的非糖基化的干扰素β，

其中该PEG具有的分子量为10kDa－30kDa，

其中在所述干扰素β和所述PEG之间的偶联包括

(a)形成经修饰的干扰素β，通过：(i)混合未经修饰的非糖基化的干扰素β和所述PEG的醛衍生物以形成席夫碱，和(ii)在一定条件下用温和的还原剂，还原所述席夫碱，从而形成仲胺键，其中所述经修饰的干扰素-β的体外生物效力是所述未经修饰的非糖基化的干扰素-β的体外生物效力的2.5倍－6倍，并且其中90％的所述PEG缀合于所述经修饰的干扰素-β的氨基-末端氨基酸；或者

(b)形成经修饰的干扰素β，通过：(i)在对至少一个必需的甲硫氨酸残基具有最小的氧化反应的条件下，用高碘酸盐将未经修饰的非糖基化的干扰素-β的N-端丝氨酸或苏氨酸残基氧化分解成醛类，和(ii)将所述醛与所述PEG的肼基甲酸酯衍生物偶联，其中所述经修饰的干扰素-β的体外生物效力是所述未经修饰的非糖基化的干扰素-β的体外生物效力的6－10倍,

其中所述体外生物效力是在响应于干扰素β的细胞培养测定法中测量的抗增殖的效力。

11.权利要求10的组合物，其中该干扰素β具有SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。

12.权利要求10的组合物，其中(a)中该PEG共价偶联至该干扰素β的氨基-末端氨基酸的α氨基上。

13.权利要求12的组合物，其中该PEG经由仲胺连接共价偶联至该α氨基上。

14.权利要求10的组合物，其中该PEG具有的分子量为18kDa－22kDa。

15.权利要求14的组合物，其中该PEG具有的分子量为20kDa。

16.权利要求10的组合物，其中该PEG具有的分子量为30kDa。

17.一种试剂盒，包含权利要求9的药物组合物。