[发明专利]具有增强的生物学效用的干扰素‑β的聚合物缀合物

说明书

本申请是申请日为2003年12月23日、申请号为200380109034.4、发明名称为“具有增强的生物学效用的干扰素-β的聚合物缀合物”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

技术领域

本发明属于蛋白质生物化学及药学和医学领域。具体而言，本发明提供一种由水溶性聚合物(例如聚(乙二醇)及其衍生物)联结细胞因子(例如β干扰素)产生缀合物的方法，相较于以标准合成方法合成的相同细胞因子的聚合物缀合物，该缀合物的效能增加。本发明也提供依该方法制作的缀合物，包含该缀合物的组合物，包含该缀合物以及组合物的试剂盒以及使用该缀合物和组合物预防、诊断以及治疗各种医学和兽医病症的方法。本发明也提供在某些条件下还原烷化以确定聚合物附着位点的方法。

相关技术

下列相关技术的描述包括解释本案不属于现有技术的部份。细胞因子是一种分泌的调控蛋白，其以内分泌、旁分泌或自分泌的方式控制细胞的生存、生长、分化、和/或效应物功能(参见Nicola，N.A.(1994)in：Guidebook to Cytokines and Their Receptors，Nicola，N.A.，ed.，pp.1-7，Oxford University Press，New York)。由于细胞因子的效能、特异性、分子小以及较易在重组生物体中产生，因此具有许多潜在的治疗剂用途。

细胞因子及重组蛋白质作为治疗剂在发展上有二个重大阻碍：其在循环系统中的半衰期短及潜在的抗原性和免疫原性。在本文及在本 领域中，术语″抗原性″意指分子结合于已存在的抗体的能力，而术语″免疫原性″意指分子在活体内唤起免疫反应的能力，不论该反应是否涉及形成抗体(″体液反应″)或刺激细胞免疫反应。

施用重组型治疗性蛋白质时，为了达到最高循环活性及减少生物利用度和降解方面的问题，经常采取静脉内(i.v.)施用。然而，以i.v.施用后，小蛋白质的半衰期通常极短(参阅例如Mordenti，J.，等人，(1991)Pharm Res 8：1351-1359；Kuwabara，T.，等人，(1995)Pharm Res 12：1466-1469)。一般而言，健康的肾脏可保留血液中水动力半径大于血清白蛋白(即Stokes半径约 以及分子量约66,000道尔顿，66kDa)的蛋白质。然而，较小型的蛋白质，包括细胞因子，例如：粒细胞集落刺激因子(″G-CSF″)、白细胞介素-2(″白细胞介素2″)、干扰素-α(″干扰素-α″)以及干扰素-γ(″干扰素-γ″)，则经肾小球的过滤快速地从血流中消除(Brenner，B.M.，等人，(1978)Am J Physiol 234：F455-F460；Venkatachalam，M.A.等人，(1978)Circ Res 43：337-347；Wilson，G.，(1979)J Gen Physiol74：495-509；Knauf，M.J.，等人，(1988)J Biol Chem263：15064-15070；Kita，Y.，等人，(1990)Drug Des Deliv6：157-167；Rostaing，L.，等人，(1998)，J Am Soc Nephrol9：2344-2348)。结果，不易在施用后使循环中保有适当治疗浓度的重组型小蛋白质。因此，一般必须施用较高浓度的蛋白质且注射次数更频繁。该方式产生的疗程使治疗成本提高，降低病人的顺服性并增加副作用的风险，例如免疫反应。细胞以及体液免疫反应会使在循环系统中重组蛋白质的注射浓度减低，以致于抵消施用有效剂量，或导致影响治疗成效的情形，包括清除加速、中和功效及过敏性反应(Ragnhammar，P.，等人，(1994)Blood 84：4078-4087；Wadhwa，M.，等人，(1999)Clin Cancer Res 5：1353-1361；Hjelm Skog，A.-L.，等人，(2001)Clin Cancer Res 7：1163-1170；Li，J.，等人，(2001)Blood 98：3241-3248；Basser，R.L.，等人，(2002)Blood99：2599-2602；Schellekens，H.，(2002)Clin Ther 24：1720-1740)。