[发明专利]一种判定视网膜细胞死亡进程的方法

权利要求书

1.一种判定视网膜细胞死亡进程的方法，其特征在于包含如下步骤：

(1)从带有遗传疾病的视网膜组织中分离出核外的总体蛋白；

(2)配制变性聚丙烯酰胺凝胶，核外总体蛋白样品经超声处理后，用聚丙烯酰胺凝胶进行分离；

(3)用Western Blotting检测核外总体蛋白样本中与抗磷酸化细胞外信号调节激酶1和抗磷酸化细胞外信号调节激酶2特异抗体产生免疫反应的抗原蛋白，进行定量分析；

(4)与免疫组织化学确定的细胞死亡曲线比对，从而判定视网膜细胞死亡进程。

2.根据权利要求1所述的一种判定视网膜细胞死亡进程的方法，其特征在于步骤(1)从带有遗传疾病的视网膜组织中分离出核外的总体蛋白的方法为：在含多种蛋白酶抑制剂的匀浆缓冲液中将组织匀浆；低速离心，沉淀细胞核，收集上清液，即为核外总体蛋白样本。

3.根据权利要求2所述的一种判定视网膜细胞死亡进程的方法，其特征在于所述的含多种蛋白酶抑制剂的匀浆缓冲液配方为：

4.根据权利要求1所述的一种判定视网膜细胞死亡进程的方法，其特征在于步骤(3)是将电泳分离后的蛋白从凝胶上转移至硝酸纤维滤膜；用抗磷酸化细胞外信号调节激酶1、2的抗体与转移至硝酸纤维滤膜上的蛋白反应；荧光标记与抗体结合的抗原蛋白条带，对其进行定量分析。