[发明专利]抗水稻白背飞虱的枯草芽胞杆菌工程菌及制备方法和应用无效
| 申请号： | 201110227130.5 | 申请日： | 2011-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN102277328A | 公开（公告）日： | 2011-12-14 |
| 发明（设计）人： | 赵秀云;祁高富;张献芳;张翼;王圣英 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;A01N63/00;A01P7/04;C12R1/125 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水稻 白背飞虱 枯草 杆菌 工程 制备 方法 应用 | ||
1.一种枯草芽胞杆菌工程菌菌株WH2，其特征在于：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)WH2，CCTCC ，NO:M2011273。
2.权利要求1所述的一种枯草芽胞杆菌工程菌菌株WH2，其特征在于：所述的枯草芽胞杆菌中含有一种分离的枯草芽胞杆菌工程菌菌株WH2的基因，其序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
3.权利要求1所述的一种枯草芽胞杆菌工程菌菌株WH2的制备方法，其步骤是：
A、表达半夏凝集素的重组载体的构建：利用半夏凝集素构建分泌表达穿梭载体pP43NMK-pta，将pP43NMK与半夏凝集素编码基因分别经PstⅠ和Hind Ⅲ双酶切消化，通过酶连成功构建了含有半夏凝集素编码基因的pP43NMK-pta载体；
B、构建枯草芽胞杆菌工程菌WH2：将构建的pP43NMK-pta质粒采用Spizizen法转化一种水稻内生枯草芽胞杆菌的制备方法中分离的水稻内生菌枯草芽胞杆菌，质粒的转化后获得枯草芽胞杆菌工程菌WH2，利用半夏凝集素基因的特异引物，对转化子进行菌体PCR，扩增产物与半夏凝集素编码基因大小相同，扩增产物测序，其与半夏凝集素编码基因的序列完全相同，提取重组菌的菌体蛋白和上清液蛋白，进行SDS-PAGE及Western Blot分析，检测枯草芽胞杆菌工程菌WH2转化子的菌体蛋白和上清中的重组蛋白半夏凝集素蛋白，枯草芽胞杆菌WH2上清中检测到24kD特异蛋白，与半夏凝集素蛋白大小相似，工程菌表达半夏凝集素蛋白。
4.权利要求1所述的一种枯草芽胞杆菌工程菌菌株WH2在制备治疗或预防水稻白背飞虱药物中的应用。
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