[发明专利]条石鲷性别特异分子标记及其遗传性别鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于水产生物技术领域中的鱼类分子标记和遗传性别鉴定技术，尤其涉及一种条石鲷性别特异分子标记及其遗传性别鉴定方法。

背景技术

我国有着丰富的鱼类资源，其中许多鱼类在生长速率上存在性别差异，如，罗非鱼、鲤鱼、牙鲆、半滑舌鳎等鱼类。因此，开展这些鱼类性别相关基因及性别特异分子标记的研究具有很高的理论指导意义。条石鲷隶属于鲈形目(Perciformes)、石鲷科(Oplegnathidae)、石鲷属(Oplegnathus)，自然分布于太平洋和印度洋沿岸，我国产于黄海、东海和台湾海峡，是一种暖温性海洋中下层鱼类。它生长速度快、肉质鲜美、抗病力强、色泽艳丽，具有较高的食用价值和观赏价值。尤其是近年来，条石鲷的人工繁育获得成功，其养殖也迅速在我国开展起来。在人工繁育及选择育种过程中，为了获得优质的苗种必须做好亲鱼选择的雌雄筛选。条石鲷第一次性成熟需要3～4年，在幼苗时期无法通过外观形态辨别其性别特征。因此，建立一种性别的快速鉴定方法用于幼苗的性别鉴定，不仅对于研究条石鲷的性别决定机制具有很高的理论价值，而且对于其定向选择育种具有重要的指导意义。

AFLP技术是可以快速筛选性状相关分子标记的有效方法，应用AFLP技术在某些动物的基因组中寻找性别标记已有成功报道。英国Stirling大学的Ezaz等(2004)用AFLP技术扫描尼罗罗非鱼基因组，找到三个Y染色体连锁(OniY425、OniY382、OniY227)和一个X染色体连锁(OniX420)的AFLP标记，其中OniX420和OniY425证明为等位基因，然而这些标记却不能鉴别没有亲缘关系的个体的性别，达不到鉴定罗非鱼遗传性别的水平。在虹鳟中，Felip等(2005)利用AFLP技术筛选到15个性别相关标记，其中，Omy-163为Y染色体连锁的标记，将其转化为SCAR标记，建立了虹鳟的遗传性别快速鉴定方法。国内学者Chen等(2007)利用AFLP技术在半滑舌鳎中筛选到7个雌性特异的标记，将其中的5个转化为SCAR标记，建立快速鉴定其遗传性别的PCR方法。由于不同鱼类之间存在着很大差异，一种鱼类的性别特异分子标记不能在另一种鱼类上应用，因此必须建立不同鱼类各自的性别特异分子标记。有关条石鲷性别特异分子标记及遗传性别检测技术，目前国内外均未见报道。

发明内容

针对现有技术中不易鉴定条石鲷幼鱼的缺陷，本发明提供了一种条石鲷性别特异分子标记及其遗传性别鉴定方法，本发明筛选出了条石鲷性别特异分子标记，并在此特异分子标记基础上建立了遗传性别鉴定方法，为条石鲷的定向育种提供理论和技术上的指导。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

本发明提供了4个条石鲷性别特异AFLP分子标记，所述分子标记的引物序列如下：

(1)5’-GACTGCGTACCAATTCACA-3’；

5’-GATGAGTCCTGAGTAACAT-3’，

用所述引物序列扩增出特异AFLP标记经克隆测序如SEQ ID NO：1所示。

(2)5’-GACTGCGTACCAATTCAGA-3’；

5’-GATGAGTCCTGAGTAACTT-3’，

用所述引物序列扩增出特异AFLP标记经克隆测序如SEQ ID NO：2所示。

(3)5’-GACTGCGTACCAATTCATC-3’；

5’-GATGAGTCCTGAGTAACGT-3’，

用所述引物序列扩增出特异AFLP标记经克隆测序如SEQ ID NO：3所示。

(4)5’-GACTGCGTACCAATTCATG-3’；

5’-GATGAGTCCTGAGTAACTT-3’。

用所述引物序列扩增出特异AFLP标记经克隆测序如SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供了SCAR分子标记，根据SEQ ID NO：1序列设计引物进行PCR扩增获得，其引物序列为：

Opl240-1：5’AGACCAAGATCAGGAGCGAAT3’；

Opl240-2：5’GGAGCATCCCATCCATTCT3’。

用所述引物在雄鱼基因组中扩增出240bp的DNA条带，在雌鱼基因组中没有扩增条带。

本发明还提供了一种用所述条石鲷性别特异分子标记的遗传性别鉴定方法，它包括以下步骤：

(1)采集待测的条石鲷的基因组DNA；