[发明专利]可代谢己烯雌酚的假单胞菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物进行环境治理领域，具体地说是可代谢己烯雌酚的假单胞菌及其应用。 

背景技术

己烯雌酚(DES，Diethylstilbestrol)，化学名为4，4(1，2-二乙基-1，2-亚乙烯基)双苯酚，是一种人工合成的非甾体雌激素类药物，能促使女性器官及副性征正常发育，促使子宫内膜增生，增强子宫收缩，提高子宫催产素的敏感性；小剂量刺激而大剂量抑制垂体前叶促性腺激素及催乳素的分泌。20世纪70年代后期，由于发现DES具有生殖和遗传毒性(包括致癌和致畸作用)，美国自1959年就开始限制DES应用于畜禽饲养，并于1979年正式禁止作为添加剂应用于畜禽生产中，在动物源性食品中不得检出。1998年，欧盟也禁止使用DES作为牲畜促生长剂，并且在进口动物食品中严格监控其残留。我国也于2002年禁止己烯雌酚及其酯类在动物源性食品中的应用。但是，目前DES仍然被大量的用于动物饲料添加剂。DES通过药物代谢等途径排出体外，进入到环境中严重污染水源和土壤环境。环境中的DES能通过食物链形式又重新危害人体和污染环境，形成恶性循环。己烯雌酚在环境中的残留易致儿童性早熟、生长发育迟缓、男子女性化，而女性易发生乳腺癌、卵巢癌等。 

现在关于处理和降解环境中己烯雌酚的研究相对较少，已经发展的关于己烯雌酚的降解有利用铁草酸盐体系对DES进行光氧化、紫外杀菌灯对水中DES进行直接光降解等方法。有关利用环境中的微生物降解己烯雌酚的研究尚未见报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用细菌自身的代谢，降低环境中己烯雌酚的浓度的假单胞菌及其应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种可代谢己烯雌酚的假单胞菌：可代谢己烯雌酚的假单胞菌(Pseudomonas sp.)J61，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)登记保藏；保藏日期为2011年04月28日；编号为CGMCC No.4705。 

可代谢己烯雌酚的假单胞菌的应用：可代谢己烯雌酚的假单胞能够降解己烯雌酚。 

所述假单胞降解己烯雌酚的降解步骤为： 

(1)J61种子培养：将假单胞菌培养在LB培养基中，培养温度为28～30℃，培养转速180～200rpm/min，培养时间为10-16h； 

(2)J61降解己烯雌酚：将步骤(1)中的J61菌体按起始浓度1.0×10⁸CFU/ml接种于含有己烯雌酚的最小培养基中进行培养，而后将培养物的上清液通过高效液相色谱(HPLC)检测剩余己烯雌酚的量，即可得到假单胞菌降解己烯雌酚的效率。 

所述HPLC的检测方法为：液相色谱仪：skyray LC-310液相色谱系统；色谱柱：Waters C18反向柱4.6×250mm，粒度5μm；检测条件为流动相，V(甲醇)∶V(水)＝85∶15；进样量为20μL；温度为25℃；紫外检测器检测参数为检测波长280nm。 

所述LB培养基为每升水中加入10g胰蛋白胨，5g酵母浸膏和10g氯化钠。 

所述最小培养基的配方为：每升水中加入1360mg磷酸二氢钾，1780mg磷酸氢二钠，500.08mg硫酸镁，500mg氯化铵，0.1mg氢氧化铝，0.05mg二氧化锡，0.05mg碘化钾，0.05mg氯化锂，0.05mg硼酸，0.1mg硫酸锌，0.01mg氯化钴，0.01mg硫酸镍，0.05mg氯化钡和0.05mg钼酸铵，pH，7.2±0.1。 

在含有己烯雌酚的最小培养基中进行培养的假单胞菌，取其上清液，加入等体积的乙醇，室温静止10min，在13,000rpm转速下离心5min，上清用0.22μm的滤膜过滤待用。 

与现有技术相比，本发明的积极效果是： 

目前，通过细菌代谢过程降解环境污染物在重金属富集、有机污染的降解和石油降解中均有应用。该假单胞菌降解环境中的己烯雌酚，具有降解速度快、费用低、操作步骤简单等优点，为彻底清除环境中的己烯雌酚残留提供了较好的思路。 

附图说明

图1为本发明实施例提供的利用本发明的假单胞菌CGMCC No.4705处理前后己烯雌酚浓度的HPLC谱图。 

图2为本发明实施例提供的假单胞菌J61的16S rDNA的序列。