[发明专利]一种清开灵注射液的定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品的定量检测方法，具体地说是一种清开灵注射液的定量检测方法。

背景技术

清开灵注射液为中药制剂，其源于传统名贵中成药″温病三宝″之一的安宫牛黄丸，由胆酸、珍珠母(粉)、猪去氧胆酸、栀子、水牛角(粉)、板蓝根、黄芩苷、金银花等八味药组成，主要功效是清热解毒、化痰通络、醒神开窍，临床上广泛用于急性肝炎、上呼吸道感染、病毒性肺炎等疾病的治疗。目前对于清开灵注射液的定量检测是通过测定总氮来控制清开灵注射液中的氨基酸成分(详见中国药典2010年版一部收载的质量标准)。该方法仅对总氮进行控制，然而总氮含量高并不意味着氨基酸含量高。为解决这一问题，有研究者采用氨基酸自动分析仪对其中的氨基酸进行测定，但氨基酸自动分析仪价格昂贵、分析时间长。由于清开灵注射液为中药制剂，亦属于高安全风险品种范畴。如何能够快速、准确地本对清开灵注射液有效成分的含量进行测定，是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种能够快速、准确地对清开灵注射液有效成分的含量进行测定的方法。

本发明目的通过以下技术方案得以实现。

本发明所提供的清开灵注射液的定量检测方法是用高效液相色谱法测定清开灵注射液中氨基酸的含量，其中：

(a)色谱条件：氨基酸分析柱，流动相A为40mmol/L Na₂HPO₄溶液，流动相B为按照体积比为45∶45∶10的乙腈-甲醇-水；流速为每分钟2.0ml；梯度洗脱：0～1.9min，100％A相，18.1～18.5min，43％A相+57％B相，18.6～22.3min，100％B相，23.2～26min，100％A相；检测波长为338nm和262nm，柱温40℃；

(b)被测样品溶液：精密量取清开灵注射液1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度；

(c)对照品溶液：称取谷氨酰胺、天门冬酰胺、色氨酸、正缬氨酸、肌氨酸、羟脯氨酸六种补充氨基酸各0.25mmol，置10ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，振摇使溶解，得补充氨基酸储备液；取20μl补充氨基酸储备液加入2ml17种氨基酸溶液中混合，即得浓度约250pmol/μl的混合氨基酸对照品溶液；

(d)测定法：分别取被测样品溶液、邻苯二甲醛、9-芴甲基氯甲酸酯各0.5μl、硼酸缓冲液2.5μl、混匀1min，置自动进样瓶中，自动进样测定；记录对照品、被测样品的色谱图，按外标法以峰面积计算。

本发明通过上述技术方案可以对清开灵注射液中的总氨基酸和主要氨基酸(谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸和甘氨酸)进行了定量检测，由此保证总氨基酸和六种主要氨基酸的含量限度，提高了清开灵注射液的国家药品标准，进而确保了清开灵注射液质量的稳定性。

本发明方法同时具有重复性好、定量准确、使用方便、操作简便快捷等特点。

附图说明

图1是对照品的色谱图。

图2是被测样品的色谱图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明做进一步的说明。

实施例1测定10个批次清开灵注射液中的氨基酸含量

材料与试剂

1.1仪器

安捷伦1200高效液相色谱仪

梅特勒-托利多AB265-S电子天平

梅特勒-托利多Delta320酸度计

1.2样品与试剂

清开灵注射液(神威药业有限公司生产的10个批次的产品)；17种混合氨基酸标准品溶液(天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸；安捷伦科技有限公司，250pmol/μl)；谷氨酰胺、天门冬酰胺、色氨酸、正缬氨酸、肌氨酸、羟脯氨酸标准品(安捷伦科技有限公司，1g)，NaH₂PO₄·H₂O(分析纯)，NaOH(分析纯)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，硼酸盐缓冲液(安捷伦科技有限公司，pH10.2)，邻苯二甲醛(OPA，安捷伦科技有限公司)，9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC，安捷伦科技有限公司)，纯化水。

2、色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse-AAA(4.6×150mm，5μm)