[发明专利]一种检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法

权利要求书

1.一种检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：以鸭黄病毒作为包被抗原，对鸭所产蛋的卵黄提取抗体，建立了检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法。

2.根据权利要求1所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：所述鸭黄病毒为鸭黄病毒（Duck flavivirus）WR株，保藏登记号为CGMCC NO.4906。

3.根据权利要求1所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：所述抗原先经过浓缩，包括如下步骤：收集含有鸭黄病毒的胚尿囊液后于4℃、8000 r/min离心30 min，上清于45000 r/min离心4℃离心2 h，弃上清后沉淀用灭菌PBS重悬，得到病毒浓缩液，储存于-70℃。

4.根据权利要求1所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：所述病毒浓缩液经进一步纯化，将病毒浓缩液通过蔗糖梯度离心纯化后经超速离心加以浓缩获得。

5.根据权利要求4所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：进一步纯化的步骤为：制备10%、20%、30%、40%和50% 等5个梯度的蔗糖平衡液，将病毒浓缩液加在10%蔗糖液上层，于4℃、40000 r/min水平离心2 h；结果在10%-20%、30%-40%、40%-50%间发现有病毒带，收集各带后4℃下45000 r/min离心2 h，弃上清后沉淀用灭菌PBS重悬，并用RT-PCR方法检测各带的病毒含量，以30%-40%带病毒量最大，得到病毒纯化液，储存于－70℃为抗原备用。

6.根据权利要求1所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：所述间接ELISA方法包括：包被抗原、封闭、加样、加酶标二抗、显色、终止。

7.根据权利要求6所述的检测鸭黄病毒病卵黄抗体的间接ELISA方法，其特征在于：所述间接ELISA方法的最佳工作条件为：抗原稀释3200倍，样品稀释40倍，酶标二抗稀释浓度为1:3200，阴阳临界值为0.45。