[发明专利]一种精浆果糖浓度检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于医学检验测定技术领域，涉及一种体外诊断用试剂盒及其检测方法，具体地说是一种精浆果糖浓度定量检测试剂盒及应用。

背景技术

精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源，直接参与精子的获能和受精。在男性不育等相关诊断与研究中，果糖浓度的测定一直占有很重要的地位。果糖的浓度可以反映精囊的分泌功能，先天性精囊缺如或患有精囊腺炎时，果糖的含量明显降低；不完全射精或射精过频时，果糖的含量亦降低。另外，果糖结合其它指标如α-糖苷酶等的检测，还可用于鉴别单纯性输精管阻塞所致的无精症和输精管、精囊发育不良引起的无精症。研究表明，睾酮的水平影响精囊果糖的分泌，雄激素不足可造成果糖含量降低，因此果糖含量还能间接反映睾丸间质细胞分泌睾酮的功能。

目前，检测果糖的化学比色法主要有化合物显色法和酶法；化合物显色法主要有吲哚法和间苯二酚法，这两者的试剂成本较低，但都需用到浓盐酸，挥发性强、危险性大、对操作者和环境均有危害，而且样本还需去蛋白处理、孵育温度高达60℃以上，致使临床使用很不方便；酶法主要有三种方法，其中一种需用到己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，检测灵敏度高，但是对这些酶的纯度要求很高，不能有任何污染，另外己糖激酶的底物特异性不是很高，葡萄糖，山梨糖、麦芽糖、半乳糖等都可干扰该反应，造成检测结果偏高；另外一种涉及到山梨醇脱氢酶，反应只有一步，但是该酶可将山梨糖可逆地转化成果糖，样品还需要离心和加热等预处理步骤；最后一种也就是本法所涉及的果糖脱氢酶，该酶底物特异性强，同时可避免样品的离心、加热或去蛋白等步骤，反应速度快，结果准确性高。但是有一点，以上所有的方法均为手工或半自动操作，加样程序多，所用试剂量大，试剂成本高，试剂和样品混匀一定的时间后，通过分光光度计逐一比色测定，然后根据公式计算出结果，同一标本一次只能检测一项，耗费了大量的时间和人力，而且人为操作误差也比较大。

现在，临床生化检验基本上都实现了自动化分析。全自动生化仪就是将原始手工操作过程中的取样、混匀、温育、检测、结果计算、判断、显示和打印结果及清洗等步骤全部或者部分自动运行，由于其测量速度快、准确性高、消耗试剂量小，现已在各级医院、防疫站、计划生育服务站得到了广泛的使用，配合使用可大大提高常规生化检验的效率及收益。遗憾的是，截止到目前，无论是国外还是国内，对于精浆果糖项目的检测，除了早期的科研成果外，尚没有一种可与全自动生化仪相配套的、商品化的检测试剂盒问世，因此，建立一种与全自动生化仪相配套使用的精浆果糖浓度定量检测试剂盒及检测方法就显得尤为迫切和重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，填补市场上的空缺，提供一种与全自动生化仪相配套使用的精浆果糖浓度定量检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供所述精浆果糖浓度定量检测试剂盒在检测精浆果糖浓度中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种精浆果糖浓度定量检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和果糖标准液，其中，

1)R1试剂包括以下含量的组份：

pH4.5-5.0缓冲液    150-300μmol/L；

显色剂             50-70μmol/L；

电子受体           285-300μmol/L；

防腐剂             0.01-0.1％；

2)R2试剂包括以下含量的组份：

pH4.5-5.0缓冲液    150-300μmol/L；

果糖脱氢酶         2.5-6.0U/ml；

防腐剂             0.01-0.1％；

3)果糖标准液包括以下含量的组份：

pH4.5-5.0缓冲液    150-300μmol/L；

果糖               20-60mmol/L；

防腐剂             0.01-0.1％；

其中：所述缓冲液为pH4.5-5.0的McIlvaine′s缓冲液、Walpole′s缓冲液或磷酸钾缓冲液；所述显色剂为噻唑蓝、碘硝基四唑紫或1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯盐；所述电子受体为吩嗪二甲酯硫酸盐或1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯盐；所述防腐剂为叠氮钠、庆大霉素或ProClin系列防腐剂中的任意一种。

精浆果糖浓度定量检测试剂盒在检测精浆果糖浓度中的应用。

精浆果糖浓度定量检测试剂盒在检测精浆果糖浓度中的应用，包括以下步骤：