[发明专利]一种采用温度诱导生产重组人表皮生长因子的方法

权利要求书

1.一种用于重组表达人表皮生长因子的构建物，其从5’至3’端依次包括以下操作性连接的元件：

噬菌体P_L启动子，OmpA信号肽基因，人表皮生长因子基因。

2.如权利要求1所述的，其特征在于，所述的噬菌体P_L启动子来源于pBLGlu2；和/或

所述的OmpA信号肽基因和人表皮生长因子基因的序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的构建物是表达载体。

4.一种基因工程菌，其特征在于，其包含权利要求1-3任一所述的构建物。

5.一种重组表达人表皮生长因子的方法，包括：培养权利要求4所述的基因工程菌，从而表达人表皮生长因子。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，先在30℃±2℃繁殖基因工程菌至菌体OD₆₆₀值超过30；之后升高培养温度至38.0±0.5℃，使基因工程菌中所含噬菌体P_L启动子启动，诱导分泌表达人表皮生长因子。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，诱导表达12±2小时。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵培养基配方为：

酵母抽提物20±5g/L，蛋白胨，20±5g/L，氯化钠1±0.2g/L，无水硫酸镁1±0.2g/L，氯化铵2±0.4g/L，硫酸铵2±0.4g/L，磷酸二氢钠·3H₂O 0.4125±0.1g/L，磷酸氢二钠·12H₂O  0.675±0.2g/L，氯化钙0.02±0.005g/L，1％维生素B10.2±0.05ml/L，葡萄糖10±2g/L；或

补料培养基配方为：葡萄糖650±50g/L，水解酪蛋白100±10g/L。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，在发酵前，进行种子培养，种子培养的条件是30℃±2℃培养12±2小时。

10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，培养7±1小时后开始补料，第1小时补料50ml，第2小时补料70ml，第3小时补料100ml，第4小时补料150ml，第5小时补料220ml；之后开始诱导表达，同时恒速补料，补料速度240ml/小时。