[发明专利]狼疮抗凝物的检测用试剂盒及其存在与否的判断方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及用于检测作为抗磷脂抗体综合征的责任抗体之一的狼疮抗凝物的试剂盒。另外，本发明涉及判断从受试者得到的待测样品中的狼疮抗凝物的存在与否的方法。

【背景技术】

抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid syndrome；以下，称之为“APS”)是血中有抗磷脂抗体，呈动静脉血栓症或习惯性流死产等的临床症状的疾病群的总称(吉田美香等，日本检查血液学会杂志.2008、9(1)：69-76)。抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies；以下，称之为“aPL”)是结合于磷脂或磷脂和蛋白质的复合物的自身抗体的总称(渥美达也、日本血栓止血学会志.2008、19(3)：329-332)。

在aPL有各种各样的抗体，根据该抗体识别的磷脂或磷脂结合蛋白质赋予了抗体的名称。在aPL中，可列举抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibodies；aCL)、抗β2糖蛋白I抗体(anti-β2glycoprotein I antibodies；aβ2GPI)、磷脂酰丝氨酸依赖性抗凝血酶原抗体(phosphatidylserine-dependent anti-prothrombin antibodies；aPS/PT)、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant；以下，也称之为“LA”)。aCL、aβ2GPI、aPS/PT通过酶免疫测定法(ELISA)检测，LA通过磷脂依赖性凝固时间的延长检测(家子正裕等，日本血栓止血学会志。2007、18(3)：226-233)。

LA被定义为“不抑制每种凝固因子活性，抑制磷脂依赖性的血液凝固反应的免疫球蛋白”，被认为是在磷脂依赖性的凝固反应中抑制磷脂本身的自身抗体。

目前，LA的检查基准如下；

(1)在测定活化部分促凝血酶原激酶时间(activated partial thromboplastin time：APTT)、稀释鲁塞尔蝰蛇毒时间(dilute Russel viper venom time：dRVVT)及高岭土凝固时间(kaolin clotting time：KCT)等的磷脂依赖性凝固时间的筛选检查中观察到凝固时间的延长，

(2)进行与健康人血浆的混合试验也不改善凝固时间的延长，

(3)由过量的磷脂的添加而确认凝固时间的缩短(磷脂依赖性的确认试验)。

最后，通过除去凝固因子的抑制剂等的明了的凝固异常或肝素等的抗凝固剂的影响，将受试者诊断为LA阳性(参照非专利文献1)。

作为那样的LA的磷脂依赖性的确认试验之一，有通过分别用以低浓度含磷脂的凝固时间测定试剂及以高浓度含磷脂的凝固时间测定试剂测定凝固时间，基于从各试剂得到的凝固时间的比确认凝固时间磷脂浓度依赖性的延长来确认待测样品中的LA的存在的方法。

另外，本发明人通过调节试剂中含的磷脂的组成而至今完成了可高灵敏度检测LA的试剂盒(US2004091952、US2005175983、及专利第4467407号公报)。

【发明内容】

本发明的范围仅由随附的权利要求确定，且不受此发明内容部分的任何限制。

虽然也可通过上述方法进行LA的检测，但用含高浓度的磷脂的试剂也有观察到凝固时间的延长的情况。即，用以往的方法，则即便是LA阳性待测样品，凝固时间的比也有示与阴性待测样品同程度的值的情况，所以明确区分LA阳性的待测样品组和阴性的待测样品组变得困难。

本发明人发现，可通过用含锰盐的凝固时间测定试剂来抑制由LA的凝固时间的延长，可明确区分LA阳性的待测样品组和阴性的待测样品组，从而完成本发明。

即，根据本发明提供：

(1)狼疮抗凝物检测用试剂盒，其包括：

含锰盐的第1凝固时间测定试剂；及

以相比上述第1凝固时间测定试剂低的浓度含锰盐或不含锰盐的第2凝固时间测定试剂；

(2)(1)所述的狼疮抗凝物检测用试剂盒，其中上述第1凝固时间测定试剂含磷脂，上述第2凝固时间测定试剂以相比上述第1凝固时间测定试剂低的浓度含磷脂；

(3)(1)所述的狼疮抗凝物检测用试剂盒，其中上述第1凝固时间测定试剂及上述第2凝固时间测定试剂含活化剂。

(4)(3)所述的狼疮抗凝物检测用试剂盒，其中上述活化剂选自：鞣花酸、高岭土、硅藻土及氧化硅；

(5)(2)所述的狼疮抗凝物检测用试剂盒，其中上述磷脂是选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱及磷脂酰丝氨酸的至少1种磷脂；