[发明专利]一种NK和/或NKT细胞的培养方法

权利要求书

1.一种培养NK和/或NKT细胞的方法，包括如下步骤：

将离体的NK和/或NKT细胞接种到如下培养体系A中，培养，即得到增殖的NK和/或NKT细胞；

所述培养体系A为如下1)或2)：

1)所示培养体系A由抗CD3抗体、Retronectin、培养基和诱导因子组成；

2)所示培养体系A由抗CD3抗体、培养基和诱导因子组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述抗CD3抗体与所述培养基的配比为5μg∶5ml；

所述Retronectin与所述培养基的配比为25μg∶5ml；

所述诱导因子为IL-2和IL-15；

所述IL-2在所述培养体系A中的浓度为800-1200IU/ml，所述IL-2在所述培养体系A中的浓度具体为1000IU/ml；

所述IL-15在所述培养体系A中的浓度为18ng/ml-22ng/ml，所述IL-15在所述培养体系A中的浓度具体为20ng/ml。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

1)所示培养体系A中的所述抗CD3抗体和Retronectin由缓冲液A提供：

每2ml所述缓冲液A按照如下方法制备：将25μg Retronectin、5μg抗CD3抗体和浓度为0.01M、PH值为7.2的PBS缓冲液混合，用所述PBS缓冲液补至2ml；

2)所示培养体系B中的所述抗CD3抗体由缓冲液B提供：

每2ml所述缓冲液B按照如下方法制备：将25μg Retronectin和浓度为0.01M、PH值为7.2的PBS缓冲液混合，用所述PBS缓冲液补至2ml；

所述培养时间为70小时-74小时，所述培养时间具体为72小时，所述培养温度为35℃-38℃，所述培养温度具体为37℃，所述培养所需CO₂的浓度为4.5％-5.5％(体积百分含量)，所述培养所需CO₂的浓度具体为5％(体积百分含量)。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

在所述培养步骤后，还包括如下步骤：

将所述培养得到的细胞移入不含有抗CD3抗体和Retronectin的培养体系B中继续培养，得到增殖的NK和/或NKT细胞；

所述培养体系B和所述培养体系A的区别为不含有抗CD3抗体和Retronectin，其它组分和各组分浓度均相同。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

所述缓冲液A、所述缓冲液B和所述诱导因子均为独立包装。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述培养基为含10％(体积百分含量)离体血浆的T503培养基；

所述抗CD3抗体为单抗或者多抗；

所述抗CD3抗体具体为Anti-CD3；

所述离体的血浆与所述离体的NK和/或NKT细胞来源于同一物种；

所述物种具体为人或动物。

7.一种用于培养NK和/或NKT细胞的培养体系，所述培养体系A为如下1)或2)：

1)所示培养体系A由抗CD3抗体、Retronectin、培养基和诱导因子组成；

2)所示培养体系A由抗CD3抗体、培养基和诱导因子组成。

8.根据权利要求7所述的培养体系，其特征在于：

所述抗CD3抗体与所述培养基的配比为5μg∶5ml；

所述Retronectin与所述培养基的配比为25μg∶5ml；

所述诱导因子为IL-2和IL-15；

所述IL-2在所述培养体系A中的浓度为800-1200IU/ml，所述IL-2在所述培养体系A中的浓度具体为1000IU/ml；

所述IL-15在所述培养体系A中的浓度为18ng/ml-22ng/ml，所述IL-15在所述培养体系A中的浓度具体为20ng/ml。