[发明专利]一种从乳汁中纯化溶菌酶的方法

权利要求书

1.一种分离纯化溶菌酶的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)将含有溶菌酶的脱脂乳清与阳离子树脂混合，从而使所述树脂吸附溶菌酶；

(b)对吸附了溶菌酶的树脂进行洗涤，从而洗去未吸附的杂蛋白；

(c)对经洗涤的所述树脂进行洗脱，从而获得含溶菌酶的洗脱液；

(d)对所述含溶菌酶的洗脱液进行超滤处理，从而获得分子量大于20kDa蛋白的组分(i)、含溶菌酶的组分(ii)和分子量小于8kDa蛋白的组分(iii)。

2.如权力要求1所述的分离纯化溶菌酶的方法，其特征在于，步骤(d)所述的超滤处理包括步骤：

将含溶菌酶的洗脱液进行第一次超滤，获得分子量大于20kDa蛋白的超滤液，即组分(i)和含溶菌酶的透过液；

对所述透过液进行第二次超滤，获得分子量小于8kDa蛋白的透过液，即组分(iii)和含溶菌酶的超滤液，即组分(ii)。

3.如权力要求1所述的分离纯化溶菌酶的方法，其特征在于，步骤(d)所述的超滤处理包括步骤：

将含溶菌酶的洗脱液进行第一次超滤，获得分子量小于8kDa蛋白的透过液，即组分(iii)和含溶菌酶的超滤液；

对所述超滤液进行第二次超滤，获得分子量大于20kDa蛋白的超滤液，即组分(i)和含溶菌酶的透过液，即组分(ii)。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对含溶菌酶的溶液进行后处理：

对所述含溶菌酶的组分(ii)进行冷冻干燥处理，或对所述含溶菌酶的组分(ii)进行结晶处理，获得溶菌酶固态产品。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括树脂前处理步骤：

(i)洗涤树脂，得到无杂质的树脂；

(ii)对步骤(i)处理后的树脂，用NaOH溶液进行搅拌浸泡；

(iii)对步骤(ii)的经NaOH溶液搅拌浸泡的树脂，用纯水进行洗涤；

(iv)对步骤(iii)获得的树脂，用HCl溶液进行搅拌浸泡；

(v)纯水洗涤步骤(iv)得到的树脂；

(vi)对步骤(v)获得的树脂，用NaOH溶液进行搅拌浸泡；

(vii)纯水冲洗步骤(vi)获得的树脂；

(viii)用缓冲液处理步骤(vii)得到的树脂，获得待用的树脂。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括树脂再生步骤，其特征在于，包括步骤：

(a)用HCl溶液对用过的树脂进行搅拌浸泡；

(b)对步骤(a)得到的树脂，用纯水进行清洗；

(c)对步骤(b)得到的树脂，用NaOH溶液进行浸泡处理；

(d)对步骤(c)得到的树脂，用纯水进行清洗，获得再生树脂。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述树脂为724树脂。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脱脂乳清来自奶牛、水牛、山羊、奶山羊、绵羊和兔。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的脱脂乳清来自转基因的奶牛、水牛、山羊、奶山羊、绵羊和兔。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶菌酶选自人、牛、羊或鸡的溶菌酶，较佳地为人溶菌酶。