[发明专利]截短的IP3受体V33K-NT及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及靶向药物功效预测方法的技术领域，具体的，涉及截短的IP₃受体V33K-NT及其应用。

背景技术

1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP₃受体）是调节Ca2+释放的配体门控通道。该受体可以结合IP₃后被激活。IP₃受体是四聚体。每个亚单位包括2700个残基，每个亚基N末端（NT，1-604）附近具有IP₃结合中心（IBC，224-604），C-末端具有6个跨膜蛋白。最末端的一对跨膜区域，连同其四个亚单位的每个转弯环区，构成孔隙结构。当3～4个部位被IP₃占据时, IP₃受体复合物构象发生改变, 打开孔隙结构, 储存的Ca²⁺ 随即释放。

1926年Perrin首次在研究论文中描述他所观察到的荧光偏振现象。以一束单一波长的偏振光照射溶液中的荧光物质，后者可吸收并释放出相应的偏振荧光。如果被激发的荧光物质处于静止状态，该物质仍将保持原有激发光的偏振性，如果其处于运动状态，该物质发出的偏振光将区别于原有激发光的偏振特性，也就是所谓荧光去偏振现象。

近年来，以这种物理学现象为基础的技术正在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。本申请人将荧光偏振现象结合现代物理中的热动力学应用于药学研究当中，发明了一套高通效的药物功效预测技术。该套药物功效预测技术需要一种截短的IP₃受体，这种受体仍然具有结合IP₃的功能，并且适合于IP₃受体靶标药物的荧光偏振分析。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供截短的IP₃受体V33K-NT，该受体的33位氨基酸发生突变，但是仍然具有结合IP₃的功能，并且适合于IP₃受体靶标药物的荧光偏振分析。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是截短的IP₃受体V33K-NT，为IP₃R1的N末端1-604残基的突变体， 所述突变体的序列具有序列表中SEQ ID NO:3所述的氨基酸序列，其33位氨基酸是由缬氨酸突变为赖氨酸。

进一步的技术方案，所述截断的IP₃受体肽段用于IP₃R靶向药物的筛选。

进一步的技术方案，所述截短的IP₃受体用于IP₃R靶向药物的筛选时，包括以下步骤：

所述截短的IP₃受体用于IP₃R靶向药物的筛选时，包括以下步骤：

A.提供荧光标记配体、作为竞争配体的待测化合物、以及3种包含IP₃结合结构域的受体多肽；分别为受体IBC、受体NT和所述截短的IP₃受体V33K-NT；所述受体IBC是位于IP₃R受体224-604位的IP₃结合中心，所述受体NT是野生型的位于IP₃R受体1-604 位的IP₃受体N末端片段；

B．竞争结合分析实验：将所述步骤A中的荧光标记配体、待测化合物、至少一种受体多肽置于容器内混合；

C．通过荧光偏振技术测定所述步骤B的容器在不同温度下对应的荧光各向异性度A，计算对应温度下待测化合物与相应受体多肽竞争结合时的平衡解离常数K_D值，根据平衡解离常数K_D值计算得到相应温度下的焓变ΔH，每种受体的焓变ΔH分别表示为ΔH _IBC、ΔH_NT 和ΔH_V33K；