[发明专利]一种T载体及其构建方法与其前T载体

权利要求书

1.一种T载体，为两个末端均带有3’-dT突出的线性载体，所述两个3’-dT突出末端的旁侧序列满足当所述T载体与两端带3’-dA的PCR产物相连后，在插入片段两端能形成两个限制性内切酶酶切位点；所述两个限制性内切酶酶切位点为同一种限制性内切酶的酶切位点。

2.如权利要求1所述T载体，其特征在于，所述限制性内切酶酶切位点为Hind III酶切位点。

3.如权利要求1所述T载体，其特征在于，所述T载体与两端带3’-dA的PCR产物相连后，除PCR产物自带的限制性内切酶酶切位点外，仅含有两个限制性内切酶酶切位点。

4.如权利要求1所述T载体的制备方法，为用产生平末端的酶酶切前T载体后，产生带有平末端的线性分子，随后在所述线性分子的末端添T后获得。

5.如权利要求4所述T载体的制备方法，其特征在于，所述产生平末端的酶为EcoRV。

6.如权利要求4所述T载体的制备方法，其特征在于，所述线性分子末端添T时所用的酶为Taq DNA polymerase。

7.如权利要求1所述T载体的制备方法，为用产生3’-dT突出末端的酶酶切前T载体后获得。

8.如权利要求7所述T载体的制备方法，其特征在于，所述产生3’-dT突出的酶为Xcm I。

9.一种前T载体，为环状的质粒载体，包括多克隆位点，其中：所述多克隆位点包含一段共有下列五个酶切位点的DNA片段，两个产生3’-dT突出末端的酶切位点，两个鉴定用酶切位点和一个产生平末端的酶切位点；所述产生平末端的酶切位点位于两个产生3’-dT突出末端的酶切位点之间；所述产生3’-dT突出末端的酶切位点经产生3’-dT突出末端的酶酶切后在载体上能产生两个3’-dT突出末端；所述两个3’-dT突出末端的旁侧序列满足当经产生3’-dT突出末端的酶酶切后的所述载体与带3’-dA的PCR产物相连后，在插入片段两端能形成所述的两个鉴定用酶切位点；所述两个鉴定用酶切位点为同一种酶的酶切位点。 

10.如权利要求9所述前T载体，其特征在于，所述产生3’-dT突出末端的酶切位点为Xcm I酶切位点，所述鉴定用酶切位点为Hing III酶切位点，所述产生平末端的酶切位点为EcoR V。

11.如权利要求9所述前T载体，其特征在于，所述前T载体由现有的质粒载体中的多克隆位点采用所述DNA片段替换后获得。

12.如权利要求9或11所述前T载体，其特征在于，所述DNA片段的序列为：SEQIN NO：1。

13.如权利要求9所述前T载体，其特征在于，所述前T载体为将pUC19经Hing III和EcoR I酶切后连入下列序列的片段获得：

5′-AGCTCGCACGCCAAGCTTCGCTTGGGATATCCAAGCGAAGCTTGGATCGTACCGTCA-3′

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3′-GCGTGCGGTTCGAAGCGAACCCTATAGGTTCTCTTCGAACCTAGCATGGCAGTTTAA-5′。