[发明专利]家蚕蛹期特异的BmCP283基因启动子及其制备方法与运用有效
| 申请号： | 201110242881.4 | 申请日： | 2011-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN102286487A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 程道军;夏庆友;唐林;徐汉福;马三垣;向仲怀 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蚕 蛹期 特异 bmcp283 基因 启动子 及其 制备 方法 运用 | ||
1.家蚕BmCP283基因启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.家蚕BmCP283基因启动子的截短片段，其特征在于：家蚕BmCP283基因启动子的截短片段，所述截短片段为如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。
3.权利要求1所述的家蚕BmCP283基因启动子的制备方法，其特征在于，具体步骤为：以家蚕基因组为模板进行PCR扩增，其中上游引物如SEQ ID NO:2所示，下游引物如SEQ ID NO:3所示；
扩增条件为：94℃预变性4分钟，94℃变性30秒，59.9℃退火30秒，72 ℃延伸90秒，共30个循环；最后72 ℃延伸10 分钟，得如SEQ ID NO:1所示的家蚕BmCP283基因启动子。
4.含有权利要求1所述的家蚕BmCP283基因启动子的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为BmCP283-DsRed-SV40片段同基础载体pBac[3xP3-EGFPafm]连接而成的pBac[BmCP283-DsRed-SV40, 3xP3EGFP]重组载体。
6.权利要求4所述的重组载体的制备方法，其特征在于，将经酶切的如SEQ ID NO:1所示的家蚕BmCP283基因启动子与经同样酶切的含有具备表达外源蛋白的基因的载体片段连接，得显微注射载体。
7.根据权利要求6所述的重组载体的制备方法，其特征在于，酶切所述显微注射载体后与经同样酶切的含有荧光蛋白标签的基础载体连接，得含有荧光蛋白标签的显微注射载体。
8.根据权利要求6所述的重组载体的制备方法，其特征在于，如SEQ ID NO:1所示的家蚕BmCP283基因启动子与载体pMD19-T simple进行TA克隆后得到的重组载体，分别用SalⅠ和BamHⅠ双酶切pMD19- BmCP283质粒，回收家蚕BmCP283基因启动子与分别用SalⅠ和BamHⅠ双酶切的pSL[ser1-DsRed-SV40]载体片段进行连接，构建成pSL[BmCP283-DsRed-SV40]。
9.根据权利要求8所述的显微注射载体的制备方法，其特征在于，用AscⅠ酶切步骤所得pSL[BmCP283-DsRed-SV40]，将酶切所获得的BmBmCP283-DsRed-SV40片段连接到AscⅠ酶切的pBac[3xP3-EGFPafm]基础载体，构建成pBac[BmCP283-DsRed-SV40,3xP3EGFP]显微注射载体。
10.如权利要求1所述的家蚕BmCP283基因启动子在家蚕蛹后期表达外源蛋白的应用。
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