[发明专利]细胞转核诱导体细胞成多能二倍体干细胞的方法

权利要求书

1.一种通过ESC与哺乳动物个体的体细胞融合而形成用于自体移植的、多潜能二倍体ESL细胞的方法，该方法包括：

a.提供ESC；

b.废除ESC的DNA复制能力；

c.将非复制的ESC与多个体细胞混合；

d.通过向其中加入聚乙二醇，将所述非复制ESC和所述体细胞融合；

e.倒置液滴培养经融合的细胞，以产生聚集的细胞；

f.在稀释的琼脂糖凝胶上将所述聚集的细胞混悬培养1-10代，以产生拟胚体(EB)；和

g.在饲养细胞上或者在涂层板和皿上或者在补充了生长因子的适宜培养基的基质胶上培养EB；和

h.选择具有干细胞典型形态并且包含哺乳动物个体特异性二倍体ESL细胞的细胞集落。

2.如权利要求1所述的方法，其中，废除DNA复制能力是通过物理处理或者化学处理而实施的。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述物理处理包括用γ射线的照射或者曝露于UV光。

4.如权利要求2所述的方法，其中，所述化学处理包括结合至染色体DNA的化学品。

5.如权利要求4的方法，其中，结合DNA的化学品包括放线菌素D、DNA螯合且相互作用剂、依托泊苷以及其他的化疗剂。

6.一种通过非复制靶细胞与体细胞融合以诱导其中重编程而形成二倍体治疗细胞的方法，该方法包括：

a.提供靶细胞；

b.废除所述靶细胞的DNA复制能力；

c.提供自体体细胞；

d.将所述非复制靶细胞与所述自体体细胞混合；

e.将聚乙二醇加至上述的混合物以融合所述细胞，其中所述非复制靶细胞重编程所述体细胞的基因组；

f.将已融合的细胞培养于适宜的细胞培养基中，以产生具有靶细胞形态和功能的二倍体细胞；和

g.选择具有靶细胞形态和功能的自体重编程二倍体细胞，

籍此制备供体可用的重编程的自体二倍体细胞，用于细胞替换疗法和化妆品。

7.如权利要求6所述的方法，其中，废除DNA复制能力是通过物理处理或者化学处理而实施的。

8.如权利要求7所述的方法，其中，所述物理处理包括用γ射线的照射或者曝露于UV光。

9.如权利要求7所述的方法，其中，所述化学处理包括结合至染色体DNA的化学品。

10.如权利要求9所述的方法，其中，结合DNA的化学品包括放线菌素D、依托泊苷、DNA螯合且相互作用剂以及其他的化疗剂。

11.如权利要求6所述的方法，其中，所述靶细胞包括外源性ESC或成体干细胞。

12.如权利要求6所述的方法，其中，所述体细胞选自成熟皮肤细胞、血液细胞或骨髓细胞。