[发明专利]从刮宫样品中获取人宫内膜间充质干细胞的方法无效

专利信息
申请号: 201110247933.7 申请日: 2011-08-24
公开(公告)号: CN102296048A 公开(公告)日: 2011-12-28
发明(设计)人: 项春生 申请(专利权)人: 杭州易文赛生物技术有限公司
主分类号: C12N5/0775 分类号: C12N5/0775
代理公司: 杭州中成专利事务所有限公司 33212 代理人: 金祺
地址: 311616 浙江省杭州市余*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 刮宫 样品 获取 宫内 膜间充质 干细胞 方法
【说明书】:

技术领域

发明属于干细胞分离培养及保存相关技术。

背景技术

干细胞技术是当今生命科学中最热门的技术之一,其研究内容几乎涉及所有生命科学的生物医学领域,除了在细胞治疗、组织/器官移植和基因治疗中发挥重要作用外,还在发现新基因、基因功能分析、发育生物学模型及新药开发等方面产生重要影响。近几年来,干细胞的研究取得了重大突破,1999和2000年,世界最权威的美国《Science》杂志连续2年将干细胞和人类基因组计划列为当年的10大科学突破。干细胞很可能在医学领域引发革命性进步,因而具有不可估量的医学价值,干细胞和人类基因组计划将同时成为新世纪最具有发展和应用前景的领域。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,简称MSCs)是来源于成熟组织中的多能干细胞,具有高度自我更新能力和多向分化潜能,同时又因为其低免疫原性而成为细胞移植和组织工程的新型种子细胞,具有广阔的应用前景。

众所周知,子宫内膜细胞系具有很强的自我更新能力。自1978年Prianishnikov提出存在子宫内膜干细胞以来,人们一直没有停止过研究子宫内膜干细胞的脚步,1993-2002子宫内膜干细胞的存在有了临床实践的支持,进一步肯定了研究子宫内膜干细胞的重要性,直到2004年Chan等证实了子宫内膜干细胞的存在,极大的激发了研究者们的研究热情。前期子宫内膜干细胞的研究材料主要是取自体内的子宫内膜组织,既不方便又限制了研究进展。2006年日本研究人员从女性月经血中成功提取出干细胞,掀起了研究经血来源子宫内膜干细胞的热潮。经美日中等多国科学家的研究证实在随女性经血脱落的子宫内膜组织中,具有相当数量的间充质干细胞——宫内膜干细胞,数量为骨髓来源的30倍;这些干细胞活力更强,更强的自我更新和增殖能力(如心肌细胞的培育效率为传统利用骨髓细胞培育的100倍),分化潜能更接近胚胎干细胞。有研究发现子宫内膜的再生细胞(ERC)不仅具有几乎每24小时复制一次的惊人速率,而且它们产生独特生长因子的速率,比来自于脐带血的干细胞要大上10万倍。

从人刮宫术获得的体液(包括血液)中就含有随之一起刮取得到的子宫内膜组织,上述理论研究使得从该体液中获取子宫内膜干细胞成为可能。人流是指用手术的方法终止妊娠,手术方法之一就是钳刮术,通过刮宫可以在取出少量胚胎组织的同时获得一定的子宫内膜组织,而随这些刮取获得的子宫内膜组织一起获得的体液便成了获取宫内膜干细胞的最好来源。相比而言,因为供体的年龄原因,该干细胞可能会拥有更强的增殖能力和更好的活力,除此之外,也可以使得原来被丢弃的体液变废为宝,无论是从研究角度还是供体角度都是有百利而无一害。如果把这些干细胞通过科学的方法储存起来,在女性未来的一生中,一旦发生肝硬化、糖尿病、心衰竭、肿瘤等重大疾病或意外严重伤害时,就可立即做自体干细胞的移植,恢复健康,减轻自己及家人的经济负担,减轻社会负担,还有可能实现女性梦寐以求的“青春常在”、“红颜永驻”的美好愿望,拥有高品质的人生。女性的宫内膜干细胞不但可用于本人,还可为她的子女、相关亲属(如堂表弟妹,甚至父母)等人的临床应用。

由于国内实行独生子女政策,一旦患血液系统恶性疾病和遗传性疾病,就只能采用异基因干细胞移植,宫内膜干细胞是异基因干细胞移植最丰富最好的资源。一旦储存了宫内膜干细胞,就相当于为其整个家族建立了一个预防和治疗肿瘤及其它相关需干细胞治疗疾病的生命银行。储存的宫内膜干细胞还可供全国和全世界患者选择作干细胞移植用,并逐步替代价格昂贵、难以找到配型相合的骨髓干细胞。全世界等待干细胞移植的患者数以亿计,仅白血病在我国的发病率就达十万分之三、四,即每年新增四万名左右的患者,而累计的白血病患者约有四百万,其中大部分是儿童,他们都急需通过干细胞移植来救治。

发明内容

本发明的目的在于针对现有干细胞来源困难或受伦理限制等问题,寻找一种更为高效的来源广泛且不受伦理限制的宫内膜干细胞分离和培养方法。在此基础上,扩增和纯化干细胞,并对所培养的干细胞进行形态和功能鉴定,从而建立具有干细胞特性的新型干细胞株,然后再将优质的干细胞资源储存。

为了解决上述技术问题,本发明提供一种从刮宫样品中获取人宫内膜间充质干细胞的方法,包括以下步骤:

1)、样品收集:

将人流产物与采集液按照1∶0.9~1.1的体积比混合;得刮宫样品;

采集液为:在每500mL的采集液中含有400单位肝素以及浓度为4mg/mL的环丙沙星和浓度为10mg/mL的卡那霉素,其余为DMEM培养基(Invitrogen公司);

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