[发明专利]接骨片及其鉴别和含量测定方法

权利要求书

1.一种接骨片的鉴别和含量测定方法，接骨片由四号铜粉2.34g，川芎39g，制川乌39g，当归39g，醋炙乳香39g，醋炙没药39g，煅自然铜39g原料药制成1000片；制备方法为：以上七味，四号铜粉、制川乌、乳香、没药、自然铜粉碎成细粉，过筛混匀；川芎、当归照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法用70％乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇，减压浓缩成膏；加入上述细粉及辅料，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，压制成1000片，包糖衣，即得；其特征在于鉴别和含量测定方法如下：

一、鉴别：

(1)取本品3片，除去糖衣，研细，加硝酸5ml，搅匀，再加水5ml，滤过，取滤液1ml，加水4ml，加亚铁氰化钾试液1-2滴，即生成蓝色沉淀。另取滤液1ml，加水4ml，加硫氰酸铵试液1滴，即显血红色；

(2)取本品24片，除去糖衣，研细，加乙醚50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚30～60℃-醋酸乙酯＝85∶15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(3)取本品24片，除去糖衣，研细，加甲醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴蒸干，水浴温度80～90℃，残渣加水30ml分散，水液转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取2次，弃去三氯甲烷液，水层用乙醚振摇提取2次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8～10μl及对照药材溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，105℃活化30分钟，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸＝10∶1∶0.5∶1上层溶液为展开剂，饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)取当归对照药材0.25g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液 挥干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液及上述“鉴别(3)”项下的供试品溶液5～8μl及对照药材溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上105℃活化30分钟，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸＝10∶0.5∶0.3∶0.5上层溶液为展开剂，饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)取本品8片，除去糖衣，研细，加石油醚60～90℃ 15ml，超声处理5分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取没药对照药材0.1g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3μl及对照药材溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，105℃活化30分钟，以甲苯-丙酮-甲酸＝8∶0.8∶1.5上层溶液为展开剂，置层析缸中饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热约8～10分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；

二、含量测定：

照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈∶0.1％磷酸溶液＝150∶850，pH应为2.6为流动相，检测波长为313nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品约13mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成每1ml含阿魏酸0.013mg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：取本品30片，除去糖衣，精密称定，研细，取约3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流提取4小时，回收甲醇至干，残渣加水20ml，用氨试液调pH10～11，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚层，水层用盐酸调pH2～3，用醋酸乙酯提取5次，每次20ml，合并提取液，用2％碳酸钠溶液提取3次，每次30ml，合并提取液，用盐酸调pH2～3，用醋酸乙 酯提取4次，每次30ml，合并提取液，蒸干，加甲醇使溶解并稀释至5ml量瓶中，摇匀，即得；

测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。