[发明专利]转基因大豆品系RRS PCR-DHPLC检测引物及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种转基因产品的检测，特别是涉及一种转基因大豆品系的PCR-DHPLC检测引物及检测方法。

背景技术

目前，全球转基因作物种植面积正迅猛增长。转基因大豆依然是最主要的转基因作物，种植面积占全球转基因作物总种植面积的一半以上。我国近年进口大豆的数量逐年增加。随着转基因作物种植面积的不断扩大，转基因作物及其食品的环境释放安全性及食用安全性也受到越来越广泛的关注。我国政府于2002年实施的《农业转基因生物安全评价管理办法》、《农业转基因生物进口安全管理办法》、《农业转基因生物标识管理办法》列出了第一批标识管理的转基因食品，转基因大豆名列首位。面对如此大批量的进口大豆，更需要快速、简便、可靠的转基因检测技术。目前的检测方法中以常规PCR、实时荧光PCR等最为方便快捷。但是对于常规PCR，其检测结果分析通常采用电泳分析，最常见的即凝胶电泳分析，这种分析方法分辨率不高，操作繁琐，需要制胶、点样、电泳、照相等，并且这些过程目前都无法实现自动化操作，工作量大。而实时荧光PCR由于目前仪器自身及荧光染料研制的限制，仅能同时提供互不干扰的4个荧光通道，也限制了该技术在检测通量扩展。

变性高效液相色谱分析检测(Denaturing High-performance Liquid Chromatography，DHPLC)是一种特异性强、分辨率高、重复性好、扩展性能好的分析检测方法。该方法可一次同时分析多个样品，对满足口岸检疫工作需要、提升转基因产品的检测水平，加强我国对进境植物及其产品中转基因成分的检疫监管、保护我国作物的生产安全具有重要意义。

目前，尚没有转基因大豆品系RRS的PCR结合DHPLC检测技术(PCR-DHPLC)。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于转基因大豆品系RRS的PCR-DHPLC检测的引物。

本发明的另一目的是提供一种基于上述引物的扩展性能好、灵敏度和分辨率高的转基因大豆品系RRS的PCR-DHPLC检测方法。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了用于转基因大豆品系RRS PCR-DHPLC检测的引物，所述引物包括引物对2，引物对2的上游引物含有Seq ID No.3所示序列，下游引物含有Seq ID No.4所示序列；

Seq ID No.3：5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTTCAATTTAACCGATGCTAATGAGTT-3’

Seq ID No.4：5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGATGCGAAGGATAGTGGGATTGT-3’。

进一步的，所述引物还包括引物对1，引物对1的上游引物含有Seq ID No.1所示序列，下游引物含有Seq ID No.2所示序列；

Seq ID No.1：5’-TCCTCCAAGGAGACGCTATTG-3’

Seq ID No.2：5’-GGTTTTGGGGTGCCGTTT-3’。

更进一步的，所述引物对1的上游引物5’端还包括Seq ID No.5所示序列，下游引物5’端还包括Seq ID No.6所示序列；

Seq ID No.5：5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACT-3’

Seq ID No.6：5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGA-3’。

需要指出的是，上述Seq ID No.5和Seq ID No.6是分别在上游引物和下游引物的5’端添加的与检测靶标序列无关的两段序列，该两段序列可以是与检测靶标序列同源性很远的其它物种的序列，也可以是随机生成的序列。该两段序列作为调控序列，可以用于控制PCR扩增产物的大小，以便于PCR扩增产物的进一步分析。

本发明中，优选的，所述引物对1的上游引物具有Seq ID No.7所示序列，下游引物具有Seq ID No.8所示序列；引物对2的上游引物具有Seq ID No.3所示序列，下游引物具有Seq ID No.4所示序列；

Seq ID No.7：5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTTCCTCCAAGGAGACGCTATTG-3’

Seq ID No.8：5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGAGGTTTTGGGGTGCCGTTT-3’。