[发明专利]新β-半乳糖苷-α2,3-唾液酸转移酶及其编码基因和生产方法

权利要求书

1.一种分离的蛋白质，其包含选自序列号2和序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列。

2.一种分离的蛋白质，其由选自序列号2及序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列组成。

3.一种具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的分离的蛋白质，其包含如下所述的氨基酸序列：该氨基酸序列与选自序列号2和序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列具有至少99％的氨基酸同源性。

4.一种具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的分离的蛋白质，其由包含选自序列号1和序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列的核酸编码。

5.一种具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的分离的蛋白质，其由下述核酸编码：所述核酸由选自序列号1和序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列组成。

6.一种具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性分离的蛋白质，其由包含如下所述的碱基序列的核酸编码：该碱基序列在0.5M磷酸钠pH7.2、1mMEDTA、7％SDS、1％BSA中65℃的杂交条件，以及40mM磷酸钠缓冲液pH7.2、1mM EDTA、1％SDS中65℃的洗涤条件下可与选自序列号1及序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列的互补链杂交。

7.权利要求1-6任一项的分离的蛋白质，其来自弧菌科微生物。

8.一种分离的核酸，其编码如下所述的蛋白质：该蛋白质包含选自序列号2以及序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列。

9.一种分离的核酸，其编码由选自序列号2以及序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列组成的蛋白质。

10.一种分离的核酸，其编码包含如下所述的氨基酸序列，且具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的蛋白质：该氨基酸序列与选自序列号2和序列号2的第22-409位氨基酸残基的氨基酸序列具有至少99％的同源性。

11.一种分离的核酸，其包含选自序列号1和序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列。

12.一种分离的核酸，由选自序列号1和序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列组成。

13.一种分离的核酸，其编码具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的蛋白质，该核酸包含如下所述的碱基序列：该碱基序列在0.5M磷酸钠pH7.2、1mM EDTA、7％SDS、1％BSA中65℃的杂交条件，以及40mM磷酸钠缓冲液pH7.2、1mM EDTA、1％SDS中65℃的洗涤条件下可与选自序列号1及序列号1的第64-1230位碱基的碱基序列的互补链杂交。

14.包含权利要求8-13任一项所述核酸的重组载体。

15.用权利要求14所述的重组载体转化的宿主细胞。

16.一种弧菌科的分离的微生物，其表达权利要求1-7任一项所述的蛋白质。

17.权利要求16所述的微生物，其为明亮发光杆菌JT-ISH-467株(保藏号NITE BP-88)。

18.一种生产具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的蛋白质的方法，包括以下步骤：

1)培养产生β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶的微生物，所述β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶是权利要求1-7中任一项所述的分离的蛋白质；和

2)从培养的微生物或培养上清分离β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶。

19.一种生产具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的重组蛋白质的方法，包括以下步骤：

1)用包含权利要求8-13任一项所述的核酸的重组载体转化宿主细胞；

2)培养经过转化的所述宿主细胞；和

3)从培养的宿主细胞或培养上清分离具有β-半乳糖苷-α2，3-唾液酸转移酶活性的蛋白质。

20.一种生产唾液酸糖链的方法，包括：

(i)制备包含权利要求1-7任一项所述的蛋白质、糖供体底物及糖受体底物的溶液；

(ii)在该溶液中进行唾液酸转移反应；和

(iii)从反应溶液获得生成的唾液酸糖链。