[发明专利]分枝杆菌噬菌体D29颗粒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种分枝杆菌噬菌体D29颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

结核病一直是对人类健康威胁很大的人畜共患传染病，特别是近二、三十年来由于人口流动、广泛耐药和多重耐药结核菌(MDR-TB)传播、艾滋病等因素影响，结核病疫情在全球范围内回升。世界卫生组织(WHO)曾于1993年宣布：全球结核病紧急状态；1998年又重申：遏制结核行动刻不容缓，并把每年的3月24日定为世界防治结核病日。WHO最新数据表明：2009年新增结核病人940万人，死于结核的病人达170万人；2008年新增MDR-TB病人44万人，死于MDR-TB的则达15万人。我国是全球22个结核病高负担的国家之一，并属于高耐药国家，结核病人数位居全球第二，多重耐药结核病占13.4％。但到目前为止，还没有理想的新型抗多重耐药结核的药物可用于临床。

噬菌体(Bacteriophage，phage)是一类细菌病毒，对一些细菌具有高度的专一性，当噬菌体侵染这些细菌时，可在细菌中繁殖并杀死细菌，而它对动植物没有毒性。因此，噬菌体以其特有的自然特征有望成为较好的抗菌药物。20世纪前叶，噬菌体曾经作为治疗、预防细菌感染的有效工具，但随着抗生素的发明与广泛应用，许多国家对此未进行深入研究。然而，面对耐药菌感染比例的不断增长，有人预言噬菌体将成为近十年生物制药领域的一大研究热点。

噬菌体已经成功地应用于多种动物细菌感染的治疗，如禽类、鱼类、犊牛、羔羊等。对预防和治疗人的细菌性感染方面也有很多临床研究。Weber-Dabrowska等对20例肿瘤患者和27例细菌感染者使用噬菌体治疗，发现所有患者的化脓、创伤、肺炎等并发现象都很快消失。Bretscher等提出使用噬菌体治疗艾滋病的再度感染，可减缓艾滋病病毒耐多药进化的速度。

分枝杆菌噬菌体D29是一种寄生于分枝杆菌的DNA病毒，由蛋白质外壳组成衣壳，内为DNA，没有独立的代谢体系，必须与宿主菌结合进入胞内，利用宿主菌的代谢酶系进行复制，最终裂解细菌，释放出子代噬菌体。分枝杆菌噬菌体D29的病毒颗粒呈类圆形，大小在75～150nm之间，具有广谱宿主，包括耻垢分枝杆菌和结核分枝杆菌等。宿主在耻垢分枝杆菌中的增殖周期为90～180min，在结核分枝杆菌中的增殖周期为3～6h以上。

分枝杆菌噬菌体D29已经普遍应用于结核分枝杆菌的快速检测及结核分枝杆菌耐药性的检测。分枝杆菌噬菌体D29用于抗结核治疗的研究中，体外实验发现分枝杆菌噬菌体D29可以减少体外生长的巨噬细胞内的耻垢分枝杆菌和结核分枝杆菌的活菌数量，具有杀灭巨噬细胞内宿主菌的能力，具有治疗结核病的可能；动物试验也证明分枝杆菌噬菌体D29可减轻结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器荷菌量，具有与利福平接近，甚至更好的疗效，且对豚鼠没有副作用，有希望作为新型抗结核药物的开发对象。

分枝杆菌噬菌体D29用于结核病治疗有其潜在优势。噬菌体具有高度的宿主特异性，只针对致病菌，不会影响到其他的菌群，因此具有无副作用的优点，同时减少了随之所带来的耐药性问题；噬菌体可以随宿主菌的增殖而增殖，并在细菌感染的整个过程中发挥作用，而不像抗生素那样随着时间的推移疗效逐渐降低。在分枝杆菌噬菌体D29用于结核病治疗的应用中，重点要解决的问题是如何到达作用部位以及以何种形式有效地到达作用部位。

分枝杆菌噬菌体D29作为一种微生物，培养获得的产物一般都是包含培养介质的液体。相对于固体而言，液体在储存、运输和使用时存在不方便以及稳定性等问题，因此微生物产品欲制成药物的话，固体化有其优势。微生物制剂采用冷冻干燥对于固化过程中维持其稳定性有利，所以在微生物制剂的保存中通常都采用冷冻干燥法。

发明内容

本发明的目的是提供一种分枝杆菌噬菌体D29颗粒及其制备方法和应用。

本发明提供的分枝杆菌噬菌体D29颗粒，它的活性成分由分枝杆菌噬菌体D29和保护剂(兼作稀释剂)组成；所述保护剂为糖和/或蛋白和/或氨基酸和/或醇。

所述糖可为蔗糖、乳糖和海藻糖中的至少一种。所述蛋白可为奶粉和牛血清白蛋白中的至少一种。所述氨基酸可为亮氨酸。所述醇可为甘露醇。

所述保护剂可为一种糖、也可为多种糖的混合物。所述糖可为蔗糖、乳糖和海藻糖中的至少一种。所述保护剂还可为蛋白，如奶粉(如脱脂奶粉)或牛血清白蛋白。所述保护剂还可为糖和蛋白的混合物，如乳糖和奶粉的混合物，或乳糖和牛血清白蛋白的混合物。所述保护剂还可为糖和氨基酸的混合物，如乳糖和亮氨酸的混合物。所述保护剂还可为糖和醇的混合物，如乳糖和甘露醇的混合物。