[发明专利]黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮液相芯片检测试剂盒及其制法

说明书

技术领域

本发明涉及检验检疫领域，特别涉及检测黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮的试剂盒，另外还涉及试剂盒的制法。

背景技术

真菌毒素是真菌产生的对人类和动物等有致病影响的一类次生代谢产物。真菌毒素种类繁多，目前已知的就多达200多种，主要包括黄曲霉毒素（AF），玉米赤霉烯酮（ZEN，又称F-2毒素），脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），赭曲霉毒素，伏马菌素（FB1，FB2）等。在这些毒素中，黄曲霉毒素是上世纪六十年代初发现的，是世界上报道最早并且是迄今研究最为深入的一种真菌毒素，而后几种毒素则不仅发现相对较晚，在检测技术研究方面也相对滞后。

   真菌毒素广泛存在于农副产品，食品和动物饲料中。农作物在生长，收割，加工及运输中都会暴露或接触到产毒真菌，从而受到侵染，导致农产品和饲料品质降低，严重时还会影响到农作物的产量。全世界每年由于霉变污染真菌毒素引起的农产品和工业原料的损失达数百亿美元。误食被真菌毒素污染的食品后可引起中毒，如胃肠道症状：恶心，呕吐，腹胀，腹痛等；肝、肾、神经、血液等系统的损害：肝功异常，血尿，蛋白尿，中性粒细胞减少或缺乏等；严重者可导致癌症。

食品安全是当今世界一个重要的主题，真菌毒素的研究与食品安全息息相关，已经越来越受到全世界的重视。在真菌毒素的检测方法方面，各国研究人员取得了很大的成就，但还没有建立起一个完善的真菌毒素检测技术体系，因此也还不能保证完全检出和杜绝被毒素污染的产品进入餐桌或进出口。真菌毒素的检测方法很多，概括起来有生物鉴定法、物理化学法及免疫分析法等。生物鉴定法检测结果直观，但其专一性差，灵敏度低，一般只作为化学分析法的佐证。传统的用于检测真菌毒素的物理化学方法有：薄层层析法（TLC），气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）。其中，TLC法比较经济，对设备和人员要求较低，但其精确度低、操作过程复杂、分析结果的可重复性和再现性差；GC法的变异系数较大；HPLC法的灵敏度和特异性好，但操作烦琐，仪器设备要求高，检测成本高，结合使用免疫亲和柱，虽可增加使用的方便性，但检测费用更高，一般只适合于科研机构或确证试验。新近发展起来的真菌毒素物理化学检测方法有：近红外光谱分析法，高效液相联合电喷质谱法，气相色谱联合质谱法和表面等离子体共振法等方法。这些方法具有较高的准确性，灵敏度和特异性，但都需要应用贵重的分析仪器，而且操作复杂；样品提取净化步骤、样品制备和前处理要求较高而使检测成本增加；测定时间长，单位时间内检测样品数量有限并且需要专业技术人员来完成操作。

近年来，免疫检测技术作为一种新技术已在农业和生物科学上有了一定的应用，而且表现出了具有满足各类检测要求的无限发展前景。目前，免疫检测技术在真菌毒素快速检测领域的应用主要集中在酶联免疫吸附测定法（ELISA）等快速分析法方面，已有相应的国家标准和试剂盒，技术专利发布。ELISA检测技术是一种较理想的检测方法，但在重复性，定量性和灵敏度方面还有亟待改进和提高的地方。

液相芯片（又称多功能悬浮点阵仪）检测技术是20世纪90年代中期美国Luminex公司开发出的芯片技术，此技术将流式检测技术与芯片技术有机地结合在了一起，它既能为后基因组时代科学研究提供强大的技术支持，又能提供高通量的新一代分子诊断技术平台。液相芯片系统的核心技术是该系统由许多直径约为5.6微米的羧基化微球构成。这些微球在制备过程中掺入了两种不同的红色荧光素分子，根据这两种红色分类荧光素的比例不同，微球被分为100种；然后通过共价方式，将针对不同检测物的寡核苷酸或蛋白质探针吸附到100种微球上，并在连有探针的微球上结合另一种绿色荧光素报告分子；检测时，双色激光将同时对红色分类荧光和绿色报告荧光进行检测，以区分不同的分析反应并确定微球上结合的目的分子数量。