[发明专利]驴或驴源性成分实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针有效

申请号：	201110255683.1	申请日：	2011-08-31
公开（公告）号：	CN102311999A	公开（公告）日：	2012-01-11
发明（设计）人：	曹琛福;宗卉;张彩虹;陶虹;花群义;秦智锋;吕建强;杨俊兴;阮周曦;刘建利	申请（专利权）人：	深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
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地址：	518045 广东省深圳***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	驴源性成分实时荧光 pcr 检测方法引物探针
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【权利要求书】：

1.一种驴或驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)设计引物和探针；

上游引物F：5’-AATAGCTCTAGCCGTACGGCTAACT-3’

下游引物R：5’-CAGGATAATGAATGTAATAAGGGCTG-3’

探针序列P：5’(FAM)-TGCCGGACATCTTCTAATCCACCTT-3’(ECLIPSE)

(2)提取驴或驴源性产品DNA；

(3)采用步骤(1)设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测。

2.如权利要求1所述的驴或驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)具体为：按DNA提取试剂盒说明提取样品DNA。

3.如权利要求1所述的驴或驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应体系为20μL，包括10μL 2×real time PCR Buffer(包含有dNTP，Mg²⁺以及Taq酶等)，步骤(1)设计的上下游引物F/R各0.4μL(终浓度为0.2μM)，TaqMan探针P 0.4μL(终浓度为0.2μM)，DNA模板2μL，超纯水补至20μL。

4.如权利要求1或3所述的驴或驴源性成分的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应程序为：预变性95℃30sec；然后95℃15sec，60℃34sec循环40次。

5.一种用于检测驴或驴源性成分的引物，其特征在于，其序列为：

上游引物F：5’-AATAGCTCTAGCCGTACGGCTAACT-3’

下游引物R：5’-CAGGATAATGAATGTAATAAGGGCTG-3’

6.一种用于检测驴或驴源性成分的探针，其特征在于，其序列为：

探针：5’(FAM)-TGCCGGACATCTTCTAATCCACCTT-3’(ECLIPSE)

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